人骨形成蛋白7荧光真核表达载体的构建及体外生物学活性检测

2007年01月25日 中华口腔医学杂志 2006 Vol.41 No.4 P.228-231 11 （武汉）为了构建携带人骨形成蛋白7(hBMP-7)基因的绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-hBMP-7，体外转染小鼠基质细胞系W-20-17，检测相关生物学活性的变化。研究者应用亚克隆法构建真核表达载体pEGFP-hBMP-7，酶切电泳鉴定。脂质体法转染W-20-17细胞，检测瞬时转染效率及目的基因的表达，观察细胞形态及生长情况，检测碱性磷酸酶(ALP)、钙结节及骨钙素等成骨细胞表型。结果48 h后，基因转染效率达到40%，报告基因及免疫荧光证明目的基因的表达。目的基因转染后细胞形态未见明显变化，增殖能力无明显改变，ALP活性明显增高，钙结节增多，骨钙素表达增强。可见成功构建了具有生物学活性的pEGFP-hBMP-7，基因转染后能诱导W-20-17细胞向成骨细胞表型转化。