重组人肝再生增强因子的克隆、表达及纯化

2006年03月21日 中华传染病杂志 2005 Vol.23 No.3 P.157-160 13 （杭州）为了通过构建原核表达系统，在大肠埃希菌中表达重组人肝再生增强因子(hALR)蛋白，为各种急慢性肝损伤及肝衰竭的治疗提供新的治疗方法奠定基础，研究者利用正常人肝组织提取总RNA，经一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获取hALR cDNA全序列，构建原核表达载体hALR-pET28a(+)转化大肠埃希菌(BL21)，诱导表达重组hALR蛋白，以组氨酸为标签进行蛋白纯化。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western Blot鉴定重组蛋白。结果经双酶切和DNA测序证实hALR cDNA正确插入表达载体pET28a(+)，成功表达并纯化得相对分子质量为23 000的重组蛋白，低温诱导表达使可溶蛋白明显增加，与预期结果相符。可见成功表达和纯化获重组hALR蛋白。