人脐静脉内皮细胞分离及冷冻保存的技术

2005年03月18日 复旦学报（医学版） 2004 Vol.31 No.5 P.509-511,514 (上海)为了研究分离、培养、扩增人脐静脉内皮细胞及进行冷冻保存技术，探讨建立脐带血管内皮细胞库的可能性。研究者用脐静脉内灌注消化酶消化新鲜脐带42条,获得内皮细胞；以含20%的胎牛血清M199液进行培养，采用Ⅷ因子免疫荧光染色及扫描电镜检查，鉴定所获内皮细胞及其纯度；内皮细胞加入含10%DMSO冷冻保存液，置于液氮进行保存，复苏后进行锥虫蓝试验，四氮唑盐试验以及细胞凋亡的流式细胞仪检测。发现血管内灌注消化液法可获取高纯度的内皮细胞，与未冻存细胞相比，复苏的细胞活力保持在95%以上。复苏后的内皮细胞的生长曲线与未冻存细胞的生长曲线无差异。冻存内皮细胞的凋亡率较未冻存细胞高，但无统计学意义。由此得知脐静脉灌注酶消化法可获取足够数量及纯度的内皮细胞，冻存的内皮细胞复苏后仍保持较高的活力及体外增殖能力，可作为制备组织工程学血管的种子细胞来源。