携带IFN-5α基因的HBV DNA质粒构建及其表达

2005年09月21日 中华传染病杂志 2005 Vol.23 No.2 P.99-103 10 （上海）为了构建携带人IFN-5α基因的X基因缺陷的HBV DNA真核表达质粒，并在真核细胞中表达，研究者在pBR322-B-HBV质粒(含adrⅠ型HBV DNA)中插入人工合成片段破坏其HBV-X基因区，再与IFN-5α片段连接，最后克隆人真核表达载体pcDNA3，获得携带人IFN-5α基因的X基因缺陷的HBV DNA真核表达质粒pcDNA3-KN-F1F2-IFN-5α。同时构建两组对照质粒，即连接完整HBV DNA的真核表达质粒和连接X基因缺陷的HBV DNA真核表达质粒，将上述3种质粒以脂质体法同时转染HepG2细胞，G418筛选出稳定表达系统后选用荧光定量PCR法、ELISA法、RT-PCR法检测3种包装病毒的复制表达以及IFN-5α的表达水平。结果获得目的真核表达质粒pcDNA3-KN-F1F2-IFN-5α；目的质粒转染HepG2细胞后其包装病毒的复制表达水平均较两个对照组降低；插入的IFN-5α片段可以在mRNA以及蛋白质水平表达。可见成功构建携带人IFN-5α基因的X基因缺陷的HBV DNA真核表达质粒，并能在HepG2真核细胞中表达。