胰腺十二指肠同源框-1基因真核表达载体的构建和转染

2006年03月06日 中华糖尿病杂志 2005 Vol.13 No.5 P.386-388 19 （长沙）为了应用阳离子脂质体介导含有大鼠胰腺十二指肠同源框-1(PDX-1)基因的真核表达载体转染胰腺导管上皮细胞。研究者利用逆转录聚合酶链反应技术克隆大鼠PDX-1基因，酶切后插入经相同酶切及磷酸化处理的含绿色荧光蛋白(GFP)的空白载体pEGFP-C2，构成重组质粒，再进行HindⅢ、BglⅡ双酶切筛选、鉴定并测序；阳离子脂质体介导转染后，荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率从而对转染条件进行优化。结果限制性酶切分析证实重组后的载体成功载入PDX-1基因；克隆的目的片断经序列测定与Genebank公布的序列一致；转染条件优化后重组载体在胰腺导管上皮细胞中有效表达。可见在国内首次成功克隆了大鼠PDX-1基因，并构建了含有PDX-1基因的真核表达载体；通过优化转染条件提高了转染效率， 为将表达PDX-1基因的胰腺导管上皮细胞作为组织工程的种子细胞提供了实验依据。