应用RNA干扰技术抑制白血病细胞血管内皮生长因子基因表达及功能的研究

2006年04月03日 中华血液学杂志2005 Vol.26 No.12 P.710-714 19 （镇江）为了探讨用RNA干扰技术下调血管内皮生长因子(VEGF)基因表达对白血病细胞生长的影响。研究者设计3段分别针对VEGF第3～5外显子的短发夹状RNA(shRNA)并构建其表达载体，分别转染人白血病细胞株NB4，用实时定量PCR及Western blot方法观察3段shRNA对细胞内VEGF基因表达的影响。抗性筛选稳定抑制VEGF表达的永久细胞克隆，应用MTT法、甲基纤维素半固体培养法及细胞周期动力学检测了解VEGF基因缄默对白血病细胞生长的影响。结果成功构建分别携带3段shRNA及对照随机片段的重组质粒pGenesil-VR1，2，3和pGenesil-con，3种shRNA重组质粒中pGenesil-VR3可明显降低细胞内VEGF mRNA的丰度及VEGF蛋白表达，筛选出的NB4-VR3细胞株增殖能力明显下降，细胞集落形成率为(13.3±3.8)%，与NB4-con的(21.3±6.4)%和NB4组的(24.5±5.2)%相比，差异有统计学意义(P＜0.05)，细胞周期阻滞于G1期，3组细胞G1期比例分别为(53.2±4.6)%、(42.7±5.9)%和(40.5±5.3)%。可见应用RNA干扰技术能筛选出特异而高效阻断VEGF基因表达及功能的shRNA，VEGF基因表达下调能明显抑制白血病细胞生长。