神经鞘氨醇磷酸胆碱对人成纤维细胞差异表达基因的筛选

2006年12月04日 中华皮肤科杂志 2006 Vol.39 No.7 P.381-384 12 （长春）为了利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建神经鞘氨醇磷酸胆碱(SPC)对人真皮成纤维细胞的差异表达cDNA消减杂交文库，从中克隆出差异表达基因。研究者原代培养人皮肤成纤维细胞,提取经SPC处理和未处理的成纤维细胞总RNA，合成cDNA，进行2次消减杂交及2次抑制性PCR，将产物与T/A载体连接，构建SPC作用于人真皮成纤维细胞的差异表达cDNA消减杂交文库，用RNA印迹验证阳性克隆，测序并登陆基因库寻找同源性基因。结果成功构建了SPC作用于人真皮成纤维细胞的差异表达cDNA文库；从实验组筛查的28个差异表达克隆中确定了6个差异表达基因，其中已知基因5个、新基因1个，分别为基质金属蛋白酶2，血小板反应蛋白1，催产素受体，锌指转录因子，铁传递蛋白受体等。可见神经鞘氨醇磷酸胆碱可上调人真皮成纤维细胞基质金属蛋白酶、血小板反应蛋白1、催产素受体、锌指转录因子、铁传递蛋白受体等基因表达。