人脂联素基因真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

2007年01月15日 中华内分泌代谢杂志 2006 Vol.22 No.5 P.464-466 7 （重庆）为了构建人脂联素(APM1)基因真核表达载体，并检测其在HEK293细胞中的表达水平。研究者用PCR法从测序正确的pGEM-T-APM1质粒上，扩增出两端带有SfiⅠ酶切位点的人脂联素基因，再将扩增出的片段亚克隆到T载体上，用SfiⅠ酶切T载体和pCDEF空载体，将酶切后的片段进行连接、转化、筛选、鉴定、测序。将成功构建的pCDEF-APM1质粒转染HEK293细胞，ELISA检测培养上清中脂联素的水平。结果 构建的pCDEF-APM1质粒能有效转染HEK293细胞，并在培养上清中检测到较高水平的脂联素蛋白。可见 成功地构建了人脂联素基因的真核表达载体，并在HEK293细胞中获得高效表达。