丙型肝炎病毒F反式调节靶基因反式激活基因的筛选和生物信息学分析

2007年01月17日 中华传染病杂志 2006 Vol.24 No.5 P.316-319 6 （北京）为了构建丙型肝炎病毒(HCV)F反式调节靶基因FTP2的反式激活基因的cDNA文库，克隆FTP2反式激活基因。研究者以HCV FTP2表达质粒pcDNA3.1(-)-HCV FTP2转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3.1(-)为对照；制备转染后的细胞裂解液，从中提取mRNA并合成cDNA，经Rsa Ⅰ酶切后将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR)，将产物与T/A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠埃希菌进行文库扩增，随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析。结果 成功构建人HCV FTP2反式激活相关基因差异表达的cDNA。扩增后得到56个200～1000 bp插入片段的克隆，随机挑选其中24个插入片段测序，并通过生物信息学分析获得其全长基因序列，结果共获得20种编码基因，其中1个为未知功能的新基因。可见 筛选到的cDNA全长序列，包括一些与细胞生长调节、物质代谢和细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因。