小鼠胚胎神经干细胞的体外培养及增强型绿色荧光蛋白基因转染研究

2007年05月11日 中国康复医学杂志 2006 Vol.21 No.10 P.877-878，892， 5 （重庆）为了探索小鼠胚胎神经干细胞(neural stem cells，NSCs)的体外培养，探讨NSCs作为基因靶细胞，以及增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)标记NSCs的可行性。研究者胚胎小鼠脑组织分离神经干细胞，无血清细胞培养，免疫细胞荧光染色技术鉴定。NucleofectorTM转染仪将增强型绿色荧光蛋白基因转导入NSCs，用G418筛选，在荧光显微镜下观察并挑选EGFP表达最强的克隆，并做免疫荧光鉴定及诱导分化细胞的鉴定。结果从胚胎小鼠脑组织分离的细胞具有连续克隆能力，表达神经上皮干细胞蛋白，诱导分化后的细胞表达神经细胞和星形胶质细胞特异性的蛋白。增强型绿色荧光蛋白报告基因转染神经干细胞后能高效表达，且不影响其增殖、分化能力。可见小鼠胚胎神经干细胞能够在体外适宜的条件下进行长期培养；神经干细胞可直接作为基因靶细胞；转染EGFP的神经干细胞表达稳定且对NSCs的增殖和分化无明显影响。