Smac/Diablo与X-连锁凋亡抑制蛋白在ATP耗竭再恢复诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用

2007年01月05日 中华肾脏病杂志 2006 Vol.22 No.11 P.669-672 15 （广州）为了研究线粒体蛋白Smac/Diablo和细胞X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在ATP耗竭及再恢复导致肾小管上皮细胞凋亡中的作用和机制。研究者应用代谢抑制剂暂时性阻断人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)内ATP的生成，再换用含糖的培养液使细胞内ATP再恢复，诱导肾小管上皮细胞凋亡。应用Hoechst33342检测肾小管上皮细胞凋亡的发生。用间接免疫荧光检测Smac/Diablo在细胞内的分布.分别提取胞质蛋白和细胞总蛋白，以Westem印迹检测胞质中Smac/Diablo、XIAP和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3前体(pro-caspase-3)的蛋白水平。结果 肾小管上皮细胞内ATP耗竭及再恢复时，Hoechst33342染色可见HK-2细胞核固缩和凋亡小体的形成；间接免疫荧光可见Smac/Diablo由线粒体释放至胞质,Western印迹可见胞质内Smac/Diablo的含量增多(P＜0.01)；XIAP和pro-caspase 3的蛋白水平降低(P＜0.05)。可见 肾小管上皮细胞内ATP耗竭及再恢复时，Smac/Diablo释放至胞质，XIAP蛋白水平降低，进而激活caspase 3，介导肾小管上皮细胞凋亡。