幽门螺杆菌UreB基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

2005年08月02日 中国药科大学学报 2004 vol.35 no.2：183-186 22 为了研制口服幽门螺杆菌疫苗，国内（南京）的一项研究构建表达幽门螺杆菌的保护性抗原成分UreB蛋白的基因工程菌株。

研究者用PCR方法扩增UreB基因片段，将其克隆至pET28a质粒上，转化E．coliB121(DE3)，经IPIG诱导表达，得到rUreB蛋白。结果显示，UreB基因片段由1710bp组成，编码569个氨基酸残基。与GenBank报道的脲酶核苷酸序列同源性最高为97％，氨基酸同源性为99％。经SDS-PAGE检测表明，rUreB基因表达的蛋白质相对分子质量约为6.4kDa，含量占细菌总蛋白的29.5％。经Ni2+柱亲和层析、GSH复性后，rUreB表现了脲酶活性，活性为32.5U／mg。

该研究表明，rUreB基因表达产物确为幽门螺杆菌脲酶B亚基，这为研制幽门螺杆菌口服疫苗打下了基础。