人真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-Cx43的构建及鉴定

2006年08月29日 中华胸心血管外科杂志 2006 Vol.22 No.2 P.130-132 13 （上海）为了构建人真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-Cx43，为研究连接蛋白Cx43在心肌细胞间通讯、心脏胚胎发育及心肌细胞分化中的作用机制提供物质基础。研究者从质粒p18-T上用限制性内切酶BamH1、Xho1切下Cx43 cDNA片断，进行琼脂糖电泳，割胶回收纯化；限制性内切酶BamH1、Xho1酶切质粒pENTR11，将线形化的载体与回收的Cx43 cDNA片断用T4 DNA连接酶连接，测序后通过LR反应克隆到慢病毒载体pLenti6/V5-DEST中。结果凝胶电泳和测序结果均证明已将人类Cx43 cDNA克隆到慢病毒载体pLenti6/V5-DEST中。可见成功构建了人真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-Cx43。