重组AAV2/hFⅨ病毒制备及其基因治疗血友病B的实验研究!-dg57687ji8u

中华血液学杂志2004 Vol.25 No.9 P.513-518

为了评价携带人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)基因的重组AAV2病毒(rAAV2/hFⅨ)肌肉注射治疗血友病B模型小鼠的疗效，中南大学学者用rAAV2/hFⅨ体外转导BHK-21、C2C12细胞后,检测细胞培养上清中hFⅨ的表达量;肌肉直接注射血友病B模型小鼠后,检测其血浆中hFⅨ的抗原水平和凝血活性等指标。结果转导24 h后在细胞上清中即可检测到hFⅨ。rAAV2/hFⅨ经肌肉直接注射后,高、中、低三个剂量组均能检测到小鼠体内高效表达hFⅨ,小鼠血浆中hFⅨ的表达量与对照组比较差异有显著性,之后缓慢下降,到第10周仍可检测到低水平hFⅨ表达;取第3周小鼠血浆样品检测凝血功能,高、中、低剂量组FⅨ活性均得到明显改善,小鼠的割尾实验出血时间明显缩短,5 min失血量也相应显著减少,FⅨ活性达到正常水平的(30.0±5.5)%;给药后第10周,除在注射点外,其它主要脏器均未检测到AAV载体DNA。该研究为临床应用该基因治疗血友病B提供了科学依据。