RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌细胞IGF1R基因表达及增强顺铂敏感性的实验研究

2008年08月04日 《中华妇产科杂志》-2008年43卷1期 -45-49页 医学空间（MEDcyber.com）8月4日消息，该项研究目的是利用RNA干扰（RNAi）技术抑制卵巢上皮性癌（卵巢癌）H08910PM细胞胰岛素样生长因子1型受体（IGF1R）基因的表达，探讨IGF1R的生物学功能及对顺铂敏感性的影响。方法采用将IGF1R基因的特异性小分子干扰RNA（siRNA）、非特异性siRNA分别转染细胞；转染后48h通过实时PCR、蛋白印迹法（western blot）、流式细胞仪分别测定IGF1R mRNA、蛋白的表达及细胞周期变化；转染后24、48、72、96h通过细胞增殖／毒性检测试剂cell counting kit-8（CCK-8）测定细胞增殖；于转染后24h给予不同浓度的顺铂作用24h，通过CCK-8法测定细胞增殖抑制率；于转染后24h给予10μg／ml顺铂作用24h，通过流式细胞仪及蛋白印迹法分别检测细胞凋亡和B淋巴细胞白血病／淋巴瘤蛋白2（Bcl-2）蛋白的表达。结果（1）转染后48h，IGF1R mRNA和蛋白的表达水平均明显下调，转染后IGF1R mRNA的表达水平下调了85．5％（P〈0．01）。（2）转染后48、72、96h，细胞增殖被明显抑制，细胞增殖活性分别为1．71±0．13、2．32±0．23、2．79±0．28，与未转染及转染非特异性siRNA的对照细胞比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。（3）转染后48h有24．37％的细胞处于G2期（P〈0．05）。（4）转染后24h联合不同浓度的顺铂作用24h，当顺铂浓度为2．5、5、10、20μg／ml时，细胞增殖被明显抑制，细胞增殖抑制率分别为（25．94±0．08）％、（40．25±0．05）％、（59．48±0．03）％、（74．18±0．08）％，差异均有统计学意义（P〈0．01）。（5）在转染siRNA24h后给予10μg／ml顺铂作用24h，可使细胞的凋亡率增加至17．95％（P〈0．05），并使Bcl-2蛋白的表达水平下调。由此得出结论通过RNAi技术可有效抑制IGF1R基因在转录和翻译水平的表达，抑制肿瘤细胞的增殖，出现G2期阻滞，明显提高细胞对顺铂化疗的敏感性。