实用高效液相色谱法的建立

本书简明扼要地论述了HPLC的原理和基础，同时介绍了许多新颖的实验方法、研究思路和工作经验。本书适用于药品检验、化工、环保、卫生等部门从事仪器色谱分析的研究和应用人员，以及高校分析化学、生物化学等专业的师生。

1998年9月第一版
王杰  赵岚峰  王树力  丁洁  译
科学出版社 1998
定价：17.00元

目录

第一章  绪论

第二章  分离的基础：流动相的作用

第三章  色谱柱的作用

第四章  系统方法的建立

第五章  困难的分离：其他分离条件和步骤的应用

第六章  梯度洗脱

第七章  特殊样品及技术

第八章  计算机辅助的方法建立

第九章  方法建立的步骤


序  言

    高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）开始应用于20世纪60年代后期。从那时起，人们对HPLC的分离机理及如何通过改变实验条件来进一步改善该方法有了长足的认识。众多的书籍、综述文章及不计其数的出版物已清晰地记述了人们不断发展和加强理解这些基础理论的历程。然而，这一科学知识在实际应用中，即使最乐观，也会碰到许多难题。不过，现在已有几种关于方法建立的系统方法制成了计算机软件。所以，在有些情况下，人们所要做的工作仅仅是将样品注入HPLC系统中，而后面的工作则完全由计算机去执行，直至其分离结果能令人满意为止。但令人遗憾的是当今这种“自动方法建立”系统的效能还不能完全令人信服。
    在绝大多数实验室中，HPLC方法的建立仍在靠经验进行。通常情况下，首先进行反相色谱实验，调整流动相中有机相的比例，以求得到足够的分离度、合理的操作时间以及易于检测（窄）的谱带。由于仅用这种方法往往不可能一次便成功，因而，色谱工作者还要安自己的思路继续探索。许多人改用不同的色谱柱，也有的人改变温度或流动相的pH。还有人优化筛选溶剂的配比组成，以其他溶剂代替原来的有机溶剂。或者试用别的HPLC方法，例如离子对色谱法、正相色谱法或离子交换色谱法。
    在方法建立中仅仅达到分离并非是所遇到的唯一挑战。实验开始所得到的峰常常较宽和/或拖尾，所以应先加以改善再继续工作，而许多人对此问题采取容忍的态度（应该说这是个错误）。还有一种情况是靠近色谱图开始部分（t0）的色谱峰挤在一起，分不开，而后面的色谱峰则保留时间太长且难以检测。这种情况应该用梯度洗脱法，但实际上色谱工作者却常常更喜欢尽可能地延长洗脱时间。偶尔情况下，由于检测灵敏度差与样品浓度太低，是主要问题成为能否检测到所分离开的样品谱峰。这时，人们则不可能在退避了，因为方法建立的第一需要应该得到可测到的色谱图。
幸运的是，HPLC是一种非常有效的手段，几无论使用下述哪种方法，一般均可分离开。但另一方面，这将会耗费大量时间，有些疑难品种需花费数月时间。低效率的方法建立步骤经常会导致最终方法在质量上妥协，即宁可使分离的质量下降，以免方法建立耗时过多。
本书的宗旨是以便捷的途径建立HPLC方法。卓有成效的工作方法应包括下列部分建议或全部建议：
    1.首先估价一下样品与分离目的（切不可低估此步骤的重要性）。
    2.设计开始的分离条件，使之有可能在一两次试验中，便可能得到有希望的色谱图。
    3.预测可能发生的问题，当问题出现时，能用已经证明的办法解决之。
    4.优先考虑使用最有希望的、能控制（或改善）分离的方法。
    5.应避免随意的“试验-错误”法，应对每次试验进行设计，能提供有用信息，而不必过分注意分离结果如何。
    6.应认识到HPLC法的目的是分离。不必时所需谱份“过度分离”，但最终的方法必须满足分析的要求，方法建立所花费的时间与精力应减少到最低限度，但不应影响分离目的。
    7.如有可能，从最初试验起就应用计算机处理数据，尽量减少方法建立所需的实验，评价并选用能帮助方法建立的商用软件。
    本书将帮助你在HPLC方法建立中实施以上建议，并深入透彻地对这些建议的基本理论进行讨论。色谱工作者在实际工作中，可借助这些方法去解决具体问题，在某些地方甚至可以进一步发挥这些建议。我们假设本书的读者已熟悉HPLC的基础理论，我们曾在《现代液相色谱导论》中讨论过。本书还引用了大量的参考文献。读者也有必要参考本书开始列出的“色谱常用符号与术语表”，因为本书将通篇使用他们，而不再另行介绍。
    本书另一个目的是将那些在HPLC方法建立中，有关计算机应用的实用工具介绍给读者。计算机在实际方法建立中虽并非必不可少，但确实可带给你更佳的方案，使色谱工作者在方法探讨中更多地节省时。Berridge和Schoenmaker已对计算机辅助的方法建立做过评论，不过，他们所注重的乃是艺术式的软件，有商用化不足或使HPLC系统造价过高的缺憾。现在已有一些小巧灵活、价格适宜的计算机程序面市，它们以HPLC的基本理论为依据编制而成，正越来越多地、卓有成效地用于优化色谱分离的条件。
    本书并未专门讨论如何处理生物来源的样品，但适用于所有化合物的总原则同样能指导这类样品的分离，但须重视的是，它们之间是存在着某些实际差异的。当前，人们对处理生物样品优选方法的认识迅速提高，只是尚未找到分离此类物质的统一模式。因此，我们选择了的等待，待将来再版时再讨论HPLC分离用于生命科学的特殊情况。
    很显然，本书的方法建立主要讨论那些小分子的反相分离法。由于当今大约有四分之三的分离采用此法，所以这样的侧重是恰当的。不过读者同样能了解到一些有关于正相分离和离子对分离的进展情况，尽管关于这些方法的系统知识还很有限。由于尺寸排阻色谱法（SEC）包含一套完全不同的优化分离概念，本书暂不做讨论。SEC主要用于分离和鉴定大分子物质，也不在本书的讨论范畴，有关这一专门知识的较充分的讨论，请参阅其他著作。


后续内容我将在以后录入，希望关注