高效液相色谱法同时测定小儿感冒冲剂中对乙酰氨基酚和咖啡因的含量

摘要:目的：建立同时测定小儿速效感冒冲剂中对乙酰氨基酚和咖啡因含量的高效液相色谱方法。方法：采用Hypersil ODS C18柱(5μm，250 mmx4.6mm)，流动相为甲醇：水(30：70)，检测波长为280nm，峰面积外标法。结果：对乙酰氨基酚在1O.08～100.80μg/ml，咖啡因在0.592～5.920μg/ml浓度范围内线性关系良好；对乙酰氨基酚回收率为98.9％ ，RSD为0.58％(n=6)，咖啡因回收率为100.15％ ，RSD为2.52％(n=6)。结论：该方法具有操作简便、结果准确等优点。
关键词:对乙酰氨基酚；咖啡因；小儿速效感冒冲剂；高效液相色谱法
小儿速效感冒冲剂是治疗感冒发热的常用药，临床应用广泛。该药处方：每袋6g含对乙酰氨基酚125mg、马来酸氯苯那敏1.5 mg、咖啡因7.5 mg、人工牛黄6mg等成分。收载于国标西药地标上国标第3册，应用紫外分光光度法对其中一种成分对乙酰氨基酚的含量进行测定，本文采用高效液相色谱法同时测定对乙酰氨基酚和咖啡因的含量，结果本实验方法简单、准确性高、重现性好、灵敏度高，故而可用于制剂室对其进行含量测定。
1 仪器与试药
美国HP1100高效液相色谱仪；包括G1311A一四元泵，G1322A-脱气机，Gl316A-柱温箱，G1314A-UV可变波长
检测器，HP1100化学工作站。
对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏(中国药品生物制品检定所提供)，人工牛黄(原料药，符合药用规定)，氢氧化钠(分析纯)，d,JL速效感冒冲剂为本院自制制剂[对乙酰氨基酚的标示含量为(100±7)％]。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
色谱柱为Hypersil ODS Cl8(5μm，250mm×4.6mm)，流动相为甲醇：水(30：70)，检测波长为280nm，流速为lml
/min，柱温为30℃，进样为20μL。
2．2 系统适用性试验
采用2．1项下规定的色谱条件测定，对乙酰氨基酚与咖啡因分离良好，分离度为8.4，理论板数：对乙酰氨基酚为5476，咖啡因为5397。
2．3 供试品溶液的制备
取d,JL速效感冒冲剂6g，研细，精密称取0.48g于25m1量瓶中，加入0.04％氢氧化钠溶液溶解并稀释至刻度，
滤，取续滤液1.0ml于10ml量瓶中，以0.04％氢氧化钠溶液定容，即得。
2．4 对照品溶液的制备
精密称取在105℃ 干燥至恒重的对乙酰氨基酚0.1g于100ml量瓶中，咖啡因15mg于250ml量瓶中，加入0.04％氢氧化钠溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液。精密量取上述液各2ml于50ml量瓶中，加入0.04％氢氧化，钠溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
2．5 空白样品溶液的制备
按处方量去掉对乙酰氨基酚、咖啡因，制成空白对照，其余同供试品处理即得。分别取对照品溶液、供试品溶液、空白样品溶液各20μ1，注入高效液相色谱仪，按“2．1项下”规定的色谱条件测定。结果空白样品溶液色谱图中，在对照品溶液色谱图中相应的位置上，无干扰峰。
2．6 供试品溶液稳定性试验
取供试品溶液(批号030305)，室温避光保存，分别于0，1，2，3，5，6h，按“样品测定”项下规定方法测定峰面积。结果表明6 h之内测定样品稳定，对乙酰氨基酚RSD为0.65％(n=6)，咖啡因RSD为0.72％(n=6)。
2．7 精密度试验
分别精密吸取对乙酰氨基酚、咖啡因的对照品贮备液配制对乙酰氨基酚、咖啡因的浓度分别为40.32，2.368μg/m1的对照品溶液，重复进样6次，测定峰面积。对乙酰氨基酚RSD为0.13％，咖啡因RSD为0.49％。
2．8 线性关系的考察
分别精密吸取对乙酰氨基酚、咖啡因对照品贮备液配制系列浓度，对乙酰氨基酚的浓度依次为10.08，20.16，40.32，60.48，80.64，100.80μg/ml；咖啡因的浓度依次为0.592，1.184，2.368，3.552，4.736，5.920μg/ml。按“2．1”项下规定的色谱条件进样，测定峰面积，以对照品浓度C对峰面积A作回归计算，得：对乙酰氨基酚：A=17.2×C+7.91(n= 6)，r=0.9999；咖叫}因：A=37.6×C+0.73(n=6)，r=0.9999。结果表明，对乙酰氨基酚在10.08～100.80μg /m1，咖啡因在0.592～5.920μg /mL浓度范围内线性关系良好。
2．9 重复性试验
精密称取同一批号样品(030520)6份，按供试品溶液的制备方法制备并测定峰面积，代入线性方程计算，结果为对乙酰氨基酚：94.21％±0.91％(n=6)，RSD=0.96％；咖啡因：116.55％ ±0.72％(n=6)，RSD=0.65％。表明该方法重复性良好。
2．10 加样回收率试验
精密称取已知含量的同一批样品(030520)6份，分别为0.4763g，0.4810g，0.4825g，0.4831g，0.4807g，0．475 2g，准确加入对照品贮备液分别为2.5ml，5.0ml，10.0ml各两份，再按供试品溶液的制备方法制备并测定峰面积，代入线性方程计算回收率。
3 样品测定
按供试品溶液的制备方法制备并测定峰面积，代入线性方程计算，测定3批样品。
4 讨论
4．1 本文作者曾试用紫外吸收光度法同时测定小儿速效感冒冲剂中对乙酰氨基酚和咖啡因的含量，但由于两者浓度比例相差较大及仪器的限制，不能准确测定咖啡因的含量，故而采用高效液相色谱法同时测定对乙酰氨基酚和咖啡因的含量，方法简单、准确性高、重现性好。
4．2 由于对乙酰氨基酚和咖啡因的两者含量相差较大，故通过紫外扫描，选取含量较小的咖啡因的最大紫外吸收波长280nm处为检测波长，减少了两者峰面积的差异，提高了方法的准确性。
4．3 据文献报道，也有用高效液相色谱法同时测定对乙酰氨基酚和咖啡因的含量的方法，但普遍存在流动相复杂，样品保留时间较长等缺点，本文作者采用该方法，有样品处理简单，出峰时间快等优点，适合用于该样品含量的快速测定。
4．4 由于咖啡因的含量较低，一般方法都未测定其含量，采用本法同时测定对乙酰氨基酚和咖啡因的含量，可控制其含量，并促进药品的制备工艺的改进，保证药品的质量及用药的安全。
参考文献
1 姜红，周希英，贾善学．／HPLC测定小儿速效感冒颗粒中对乙酰氨基酚和咖啡因的含量[J]．山东医药工业，2002，21(5)：9—10