点击显示 收起
黄柏为芸香科植物黄皮树Phellodendron chinense Schneid.的干燥树皮。2005版《中国药典》一部采用高效液相色谱法测定其盐酸小檗碱的含量。文献报道的黄柏及其制剂中盐酸小檗碱的含量测定方法主要有高效液相色谱法和薄层扫描法等。
一、高效液相色谱法
2005版《中国药典》黄柏含量测定项下：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸溶液（50：50）为流动相；检测波长为265nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不得低于4000。
供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约0.1g，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相80ml，超声处理（功率250W，频率40kHz）40分钟，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
HPLC法测定黄柏及其制剂中盐酸小檗碱的含量文献报道较多，被广泛应用，常用的流动相系统为：
A：乙腈-磷酸-三乙胺系统：
①Agilent 1100 高效液相色谱仪；Elite HyPersil C18柱（4.6mm×250mm,5μm），流动相：乙腈-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液-0.025mol/L十二烷基硫酸钠溶液(50：25：25)；检测波长345 nm；柱温250℃。
②美国BIO-RAD公司高效液相色谱仪；Intersil C18分析色谱柱(4.6mmID×250mm,粒径5μm)；流动相：水-乙腈(69：31,含0.5%三乙胺,磷酸调pH3.0)；检测波长350nm。
③日本岛津LC-10AT；色谱柱为DiamonsilTM C18(250mm×4.6mm,5μm) ；流动相：乙腈和三乙胺-水(0.2：70,用磷酸调pH=4),梯度洗脱；检测波长为270nm。
B：乙腈-磷酸二氢钠（钾）溶液-硫酸钠溶液
①美国惠普公司HP1050A-型高效液相色谱仪；ODSC 18分析柱( 250mm×4.6mm, 7μg)；流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾(47：53), 1000ml中加入十二烷基磺酸钠17g；检测波长345 nm；室温操作。
②岛津LC-2010A型高效液相色谱仪；色谱柱：Shim-pack VP-ODS（250mm×4.6mm）柱；柱温30℃；检测波长345nm；流动相：乙腈-0.05mol/ L磷酸二氢钾(磷酸调PH至3.5) (28：72)。
③日本岛津LC-2010高效液相色谱仪；色谱柱为Shim-pack VP-ODS（200mm×4.6mm）；流动相：乙晴-磷酸盐缓冲液（0.05mol/L磷酸二氢钾和0.05mol/L庚烷磺酸钠(1:1)(40:60),含0.2%三乙胺；检测波长为347nm；柱温30℃
④Gilson 307 高效液相色谱仪；色谱柱Kromasil C18 (5μm,200×4.6mm)；流动相：乙腈- 0.1mol/L磷酸二氢钾-0.025mol/L十二烷基磺酸钠(50：25：25)；检测波长345nm；柱温室温。
另外，主要有：陈腾等用高效液相色谱法测定阴立爽洗剂中盐酸小檗碱含量。采用Waters 515 HLPC Pump。色谱条件：色谱柱为BDS 柱(200mm×4.6mm),流动相为乙腈-醋酸乙酯-甲醇-0.5M NaH2PO4 溶液(37：10：10：60,加1%三乙胺,磷酸调pH至3.5),检测波长为270nm,柱温室温。
王鹰等测定利肤康乐洗剂中盐酸小檗碱含量，采用美国Waters 液相色谱仪。色谱柱为BDS柱(200mm×4.6mm),流动相为乙腈-0.5M NaH2PO4溶液-二甲胺( 37：63：0.2),检测波长为346nm,柱温室温。
刘腊娥等测定肾康口服液中盐酸小檗碱的含量。采用色谱柱为 Novapak C18(150mm×319mm , 5μm)；预柱：Novapak C18 (20mm×319mm)；流动相：甲醇-乙腈-0.05mol/ L磷酸二氢钠(20：35：45)；检测波长346nm；柱温24℃。
刑俊波等测定黄地颗粒中盐酸小檗碱的含量，采用色谱柱为Hypersil（100mm×4.6mm，5μm）；流动相为醋酸乙酯-甲酸-无水乙醇（110：30：60）；检测波长为345nm；柱温40℃。
样品的处理方法一般以甲醇、乙醇和甲醇-盐酸混合溶液等为溶剂超声或回流提取。
二、薄层扫描法
薄层扫描法测定黄柏及其制剂中盐酸小檗碱的含量，常用的展开系统为苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-水和苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液，样品处理方法一般以甲醇和乙醇为提取溶剂。
李季媛测定白头翁止痢片黄柏中盐酸小檗碱含量时，展开系统为苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6：6：1.5：1.5：0.3)，扫描波长λS=340nm,λR=205nm。
李红纪等测定肾炎灵片中盐酸小檗碱含量时，展开系统为苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液（12：6：3：3：1），氨蒸气饱和。扫描波长为λS=345nm,λR=370nm。样品以乙醇为溶剂索氏提取，经氧化铝柱层析净化。
周晓英测定黄柏胶囊中盐酸小檗碱的含量时，展开剂为正丁醇-冰乙酸-水(7：1：2)。扫描波长为λS=428nm,λR=520nm。
三、毛细管电泳法
张艺等采用高效毛细管区带电泳法对如意金黄散中的盐酸小檗碱及盐酸巴马亭进行定量测定。采用HP3D全自动毛细管电泳仪。分离电压20kv；测定波长230nm；进样量5066Pa×8s；缓冲液为10mmol/L混合磷酸盐溶液，以盐酸调节pH至4.8,含30%乙腈。毛细管温度30℃。每次进样前, 均用缓冲液冲洗毛细管柱10min ,每次分析后用1mol/L氢氧化钠溶液冲洗10min ,蒸馏水冲洗10min。样品用乙醇-盐酸混合溶液回流提取。