青藤碱(Sinomenine)是具有镇痛、消炎、怯风除湿、活血化瘀、增强免疫和抗癌等作用的生物碱。它存在于防己科植物青风藤和毛青藤的干燥藤茎中。在
临床上，已有正青风痛宁片、盐酸青藤碱注射液和毛青藤总片等
制剂，用于治疗各种急慢性风湿痛、肿胀以及心率失常等病症。青藤碱含量测定常用非水滴定法，但该法专属性差，实验结果易偏高。此外，还有薄层色谱法、薄层-分光光度法、薄层-胶束荧光法、极谱法和高效液相色谱法等。用毛细管电泳测定青藤碱的方法尚未见报道．与毛细管电泳光学检测相比，毛细管电泳电化学检测不存在光程短、光路复杂及仪器价格昂贵等问题，装置简便易行．电导检测是一种通用的电化学检测方法，其中高频电导检测法(非接触式电导检测法)的检测电极与被测溶液隔离，除了具有普通电导检测的优点之外，还避免了普通电导检测装置因电极与溶液接触而导致的诸多问题，从而解决了分离电场对检测的干扰和电极中毒等问题，故电极寿命长，成本低，检测灵敏度较高，使用极为方便，可广泛用于荷电成分的检测．本文采用自行研制的毛细管电泳高频电导检测装置嘲，在弱酸性NaAc-HAc缓冲液中，对盐酸青藤碱片剂和
中药青风藤中的青藤碱进行了分析．
1 实验部分
1．1 仪器与试剂 自制高压电源和高频电导检测器．石英毛细管(150μm i．d．)为河北永年光导纤维厂产品．数据工作站由中山大学化学与化学工程学院提供，信号采集使用台湾EVOC制造的PCL-711B型A／D卡；数据记录与处理在普通P4微机上完成．中草药粉碎机．超声波提取器．
盐酸青藤碱对照品(中国药品生物制品检定所)，三(羟甲基)氨基甲烷(Tris，G．R．级，香港分装)；其它试剂均为国产分析纯；所用水为二次蒸馏水；青风藤药材购自广州采芝林药店(产地：陕西太白)；
正清风痛宁片(北京万辉药业集团生产)．
1．2 对照品和样品溶液的制备称0.O15 0 g盐酸青藤碱对照品，加水定容于10mL容量瓶中，得1.50mg／mL的对照溶液．称0.200 0 g粉碎过筛后的青风藤粉末，加入5mL75%的乙醇，浸泡1Omin，超声30min，振摇后静置，过滤；取残渣加入5mL 75%的乙醇，再次超声提取30min，振摇后静置，过滤，合并2次滤液，定容于1O mL容量瓶中，得青风藤待测样品溶液．取2O片正清风痛宁片，研细，精密称取适量，加5mL水，超声溶解10min，过滤；取残渣加入5mL水，再次超声溶解1Omin，过滤，合并2次滤液，定容于10mL容量瓶中，得正清风痛宁片待测样品溶液．
1．3 实验方法 毛细管在使用前，先用0.1mol／L NaOH，H2O和运行缓冲液分别洗3O，15和15min．每次进样运行完毕后，用运行缓冲液冲洗3Os后再进样．采用重力虹吸方式进样，进样时间14s，进样高度25cm，分离电压22kV．实验在恒温(25℃)和恒湿(相对湿度60%)条件下进行．
2 结果与讨论
2．1 缓冲溶液种类的影响 考察了Hac-NaAc，Tris-H3BO3，NaH2PO4-H3PO4和Na2HPO4-NaH2PO4等几种缓冲体系对分离的影响．结果表明，在Tris-H3BO3缓冲体系中，青藤碱不出峰；在NaH2PO4-H3PO4和Na2HPO4-NaH2PO4缓冲体系中电泳电流较大，青藤碱峰形较差，出峰较慢；Hac-NaAc是较理想的缓冲体系，在较高的分离电压下电泳电流很小，出峰较快，且峰形对称，检测灵敏度较高，故选择Hac-NaAc为运行缓冲溶液．分别以摩尔比为2：0.2：1.2：2.2：3.2：4.2：5.2：6的Hac-NaAc缓冲体系作为运行缓冲溶液，考察了体系摩尔比对分离检测的影响，结果可见随着NaAc浓度增大，青藤碱的信号逐渐增大，迁移时间缓慢增加，当NaAc浓度超过3.0mmol／L时，信号强度逐渐降低．可以认为在较强的酸性条件下，青藤碱分子中的叔丁基N原子经质子化后带正电荷，其迁移方向与EOF方向一致，故出峰较快．随着酸性减弱，质子平衡发生移动，青藤碱的质子化程度降低，所带的有效正电荷相应减少，故出峰延迟；响应信号的强度与青藤碱的质子化程度有关，在NaAc浓度为3.0mmol／L时达到最大，故此时灵敏度最高．实验选择Hac-NaAc的浓度为2.0mmol／L～3.0mmol／L(pH值为4.9)．
2．2 添加剂种类和加入量的影响 考察了不同种类的有机溶剂甲醇、乙醇、乙腈、丙酮和四氢呋喃等添加剂(体积分数均为10%)对分离测定的影响．结果表明，选用甲醇添加剂可有效地提高青藤碱的检测灵敏度．考察了添加体积分数为0，5.0%，lO. 0%，15. 0%，2O. 0%，25.0%和3O.0%的甲醇缓冲液体系对分离和检测的影响，结果表明，随着甲醇体积分数增大，电泳电流变小，出峰时间逐渐延迟，峰高先增大后减小，综合考虑检测灵敏度和出峰时间等因素，选择甲醇的体积分数为10.0%．
2．3 分离电压和进样量的选择 考察了10～28kV的分离电压对分离的影响．结果表明，提高电压可以提高分离度和缩短分析时间，但电压太高时，体系产生的焦耳热增加，基线噪音较大，分离度变差，不利于分离．因此，综合两种因素考虑，优化条件为22.0 kV．
2．4 最佳实验条件和线性范围 选定的最佳条件如下：分离介质为2.0mmol／L Hac-3.0mmol／LnaAc-10.0%CH3OH(体积分数)，pH=4.9，分离电压22kV，以25cm位差虹吸进样14s，毛细管总长65cm，有效长度55cm．青藤碱质量浓度在1.0～36.0μg／mL范围内线性关系良好．线性方程为Y=56.4X+39.2(Y为峰面积；X为质量浓度，μg／mL)，r=0.998，检出限为0.2 μg／mL(S／N=3)．方法重现性好，峰面积的RSD为1.4%(n=6)．
2．5 样品提取、分析和加标回收实验 实验曾采用运行缓冲液和不同浓度乙醇溶液为溶剂提取青风藤．将提取液适当稀释后进样测定，结果发现，以运行缓冲液为溶剂提取的样品溶液进样后，背景值较大，杂峰较多，结果偏低．乙醇的体积分数对提取效果影响较大，经考察，体积分数为75%的乙醇水溶液提取效果较好．在选定的实验条件下，将青风藤提取液稀释5倍，进样测定，根据线性回归方程计算得青风藤中青藤碱含量为0.70%．取片剂样品溶液适当稀释后进样测定，计算得片剂中青藤碱含量为19.2mg／片．分别将对照品溶液与两种样品溶液按不同比例混合，测得标准加入回收率．
参考文献
[1] Editorial Committee of Pharmacopoeia of People s Republic of China(中华人民共和国卫生部药典委员会编)．The Pharmacopoeia of People s Republic of China，Vo1．1(中华人民共和国药典，一部)[M]。Beijing：Chemical Industry Press。1995：165
[2] LIU Qiang(刘强)，ZHOU Li—Ling(周莉玲)，LI Rui(李锐)．Chinese Traditional and Herbal Drugs(中草药)[J]，1997．28(4)：247— 249
作者：
2007-5-25