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3、HPLC在中药及药用植物分析中的应用
3.1 植物药
植物药分析的主要目的是：（1）通过真实样品和未知样品的谱图对比，控制植物药的质量；（2）分离测定植物药中的活性组分满足临床用药和药理研究的需要；（3）为活性组分的制备分离摸索条件；（4）开发新的中药资源。中药中的活性组分的提取一般采用水煮，醇、氯仿、石油醚等有机溶剂提取，提取方法包括索氏提取、超声波萃取和超临界流体萃取。洗脱方式一般为反相等浓度洗脱，对复杂样品的分析梯度洗脱则有很多优越性。研究最多的药效活性组分有生物碱、各种甙类、黄酮、有机酸、香豆素等。表1列出了用HPLC分析植物药中这些活性组分所采用的色谱条件及检测方法。
3.2 中药方剂
中药方剂一般由几种甚至几十种中药材组成，化学成分非常复杂。目前我们对中药方剂中的有效成分的认识还相当有限，有待开发准确地评价中药方剂质量的分析方法。人们由分析中药复方制剂中的一种活性组分到分析几种活性组分，逐渐提高评价中药制剂的水平。日本和台湾的健康福利部门都已明确规定，凡申请检察和注册的中药制剂必须包括至少两个做为质量指标的化学成分的含量分析。
Wen等对3种含黄芩、葛根的中药复方制剂中的黄芩甙、葛根素进行了测定〔26〕。Lee以0.03%磷酸/乙腈（V/V）为流动相在Cosmosil5C18-AR柱上用梯度洗脱同时测定了由多味药材构成的中药复方制剂中的甘草甙、甘草甜素、橙皮甙、桂皮酸、桂皮醛、厚朴酚、和厚朴酚等7种活性组分〔27〕。在同样的柱和流动相条件下，Lin等以对羟基苯甲酸丙酯为内标，测定了中药制剂中的龙胆苦甙、芒果甙、小檗碱、黄芩甙、次黄芩素和甘草酸〔28〕。表2中列出了近年来为分析中药制剂中的活性组分开发的HPLC方法。
3.3 生物样品
为了安全、合理、有效地使用药物，需要了解药物体内过程的信息，药代动力学研究药物及其制剂的体内过程（吸收、分布、代谢、排泄）、作用机理及药物效应。建立药物药代动力学模型的先决条件是开发出能够准确测定药物母体化合物及其代谢产物在各种体液中的浓度，分析的质量则取决于方法的有效性和样品设计，如：取样数目、时间间隔、取样体积等。由于HPLC的选择性好，自动化程度高，分析时间短等优点，多数实验和临床的药代动力学研究都采用这一分析方法。
样品制备在HPLC的生物样品分析中是关键性的一步，其主要目的是：（1）将待分析物与蛋白质分离；（2）去除影响分析物保留和定量准确度的干扰物质；（3）浓缩待分析物以提高检测的灵敏度和检测限。生物样品包括体液（血清、血浆、全血、尿等）、组织液和其它样品。经典的样品预处理方法包括蛋白质沉淀和萃取。液液萃取是最常用的样品预处理方法，它能起到样品净化（去除干扰化合物）和去除蛋白质（将分析物从蛋白质基质中分出）的双重作用。沉淀方法中，沉淀剂（有机改性剂、盐、酸，如：三氯乙酸、高氯酸、钨酸、偏磷酸）被加到样品中，通过离心将沉淀除去，此方法的缺点是大大增加了分析时间，同时由于分析物在沉积蛋白质上的吸附而降低了回收率〔29〕。在生物样品分析中，直接进样技术在节约时间和劳力方面显示出了相当大的优越性。现已有几种直接进样方法，如柱切换、直接进样固定相、胶束色谱等〔30〕。为了研究中药的药代动力学，Homma和Oka建立了一个测定尿样中厚朴、8，9-二羟基-二氢木兰醇、medicarpin、甘草素、黄芩甙元、次黄芩素、木蝴蝶素A和二羟苯基羟基苯酮等8个组分的HPLC方法。样品经葡糖苷酸酶酶解后，分出亲油性组分，在正相柱上鉴定厚朴，在反相柱上鉴定其它组分〔31〕。异钩藤碱是传统中药钩藤的主要生物碱，有降低血压等效应。黄等〔32〕用乙醚萃取兔血浆，在ODS柱上，以甲醇-水（95∶5，V/V）为流动相，建立了兔血浆中异钩藤碱浓度的HPLC方法。血药浓度在0.016～16mg/L范围内呈线性关系，血浆最低检测浓度为0.016mg/L，绝对回收率为80.5%～85.1%。另有报道〔33〕，分别用乙醚和氯仿-异丙醇（4∶1，V/V）处理人血清和尿液，HPLC分析，盐酸青藤碱在体内的药代动力学过程符合二室开放模型，体内消除符合一级动力学消除过程。叶等〔34〕开发了测定血浆、尿及各种组织液中的淫羊藿甙的HPLC方法，此方法用乙酸乙酯萃取样品，已用于淫羊藿甙的药代动力学研究。用乙醚萃取犬血浆、小鼠组织、体液中的紫杉醇，HPLC分析，获得了一些药代动力学参数．