麻杏止咳合剂的质量标准研究

【摘要】 目的 研究麻杏止咳合剂的质量控制方法。方法 采用薄层色谱法对麻杏止咳合剂中麻黄、甘草、金银花进行定性鉴别,采用高效液相色谱法测定麻杏止咳合剂中盐酸麻黄碱的含量。结果 麻杏止咳合剂中的麻黄、甘草、金银花的供试品薄层色谱中,在与对照品色谱相应位置上显相同颜色斑点；盐酸麻黄碱对照品在0.020 0～0.200 0 μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.22%。结论 该质控方法简便准确、灵敏度高,可以用于麻杏止咳合剂的质量控制。

【关键词】  麻杏止咳合剂；盐酸麻黄碱；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准

Study on Quality Standard of Apricot Kernel Cough Mixture 
　　ZHU Xing-gui

　　Jingmen Hospital of TCM, Jingmen 448000, China

    Abstract：Objective To study the quality control method of apricot kernel cough mixture. Methods Chinese ephedra, liquorice and honeysuckle in apricot kernel cough mixture were qualitative examined by thin-layered chromatography (TLC), and the content of ephedrine hydrochloride was measured by high performance liquid chromatography (HPLC). Results The spots in the TLC of Chinese ephedra, liquorice and honeysuckl were in the same color with those in the chormatograms of control articles. For ephedrine hydrochloride, linear range was 0.020 0～0.200 0 μg and the average recovery was 99.22%. Conclusion The quality control is simple, accurate and highly sensitive. The methods can be used for quality control of apricot kernel cough mixture.

    Key words：apricot kernel cough mixture；ephedrine hydrochloride；TLC；HPLC；quality standard
 
    麻杏止咳合剂是本院已故名老中医朱必泉的经验方,由麻杏石甘汤加味而来,具有辛凉解表、清热解毒、润肺止咳、化痰平喘作用。用于急性支气管炎、支气管肺炎,症见咳嗽痰盛、喘促气逆、咽痛等,特别对于风热型咳嗽疗效确切。本试验对其质量控制标准进行研究。

　　1  仪器与试药

    HP1100高效液相色谱仪,包括UV可变波长检测器(美国惠普)；Camag薄层自动涂布仪(日本岛津)；UV-240紫外分光光度计(日本岛津),梅特勒-托利多Excellence XP205分析天平。盐酸麻黄碱对照品(批号110721-200512)、甘草对照药材(批号081-200423)、绿原酸对照品(批号110753-200413)均购自中国药品生物制品检定所。硅胶为青岛海洋化工厂生产；乙腈：HPLC级(fishier scientific公司)。麻杏止咳合剂为本院自制(批号071028,070516,070403),缺甘草的阴性样品和金银花等药材均由本院提供。所用试剂均为分析纯。

　　2  处方组成及制备方法

    麻杏止咳合剂药物组成：麻黄1 500 g,苦杏仁1 500 g,石膏3 000 g,甘草750 g,金银花1 500 g,连翘1 500 g,紫菀750 g,人工竺黄1 500 g。以上8味,石膏、人工竺黄加水先煎1 h后再将其余药加入煎煮3次,每次1.5 h,合并煎液,过滤,静置后取上清液并浓缩至适量,取3 000 g炼蜜与浓缩液合并煮开,加苯甲酸钠10 g和羟苯乙酯5 g(配成10%乙醇溶液),搅匀,加水调整至10 000 mL(相对密度不低于1.14),灌装灭菌即得。

　　3  质量标准研究

　　3.1  性状

    本品为棕黄色至棕褐色的粘稠液体；味甜。

　　3.2  薄层鉴别

　　3.2.1  麻黄 

　　取本品20 mL,置分液漏斗中,加浓氨试液2 mL,加乙醚20 mL,振摇,将混合溶液离心,取上清液,下层溶液再加乙醚20 mL,振摇,离心,合并上清液,置分液漏斗中,取乙醚液蒸干,残渣加甲醇0.5 mL使溶解,作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品,加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法[2OO5年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验[1],吸取对照品溶液5 μL、供试品溶液10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇-浓氨试液(20∶5∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%茚三酮乙醇溶液,在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。

　　3.2.2  甘草 

　　分别取本品与缺甘草的阴性对照样品各10 mL,加乙醚20 mL,振摇提取,弃去乙醚液,水层用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20 mL,合并正丁醇液,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次20 mL,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇2 mL使溶解,作为供试品溶液。另取缺甘草的阴性对照样品,同法制成阴性对照溶液。再取甘草对照药材1 g,加水80 mL煎煮至约20 mL,滤过,取滤液同法制成对照药材溶液[2]。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验[1],吸取上述3种溶液各1 μL,分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在 105 ℃加热至斑点显色清晰,置于紫外光灯(波长为365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,阴性对照液无相应的斑点。

　　3.2.3  金银花 

　　取本品1 mL,加无水乙醇4 mL,摇匀,滤过,作为供试品溶液。另取金银花对照药材1 g,加水20 mL加热提取,滤过,滤液浓缩至5 mL,取滤液1 mL,照供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。再取绿原酸对照品,加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验[1],吸取上述3种溶液各1～2 μL,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(1∶15∶1∶1∶2)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱及对照品色谱相应在的位置上,显相同颜色的荧光斑点。

　　3.3  含量测定

    照高效液相色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥD]测定[1]。

　　3.3.1  色谱条件与系统适用性试验 

　　以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1%磷酸溶液(含0.1%三乙胺)(5∶95)为流动相,流速1.0 mL/min,柱温25 ℃,进样量10 μL,检测波长为207 nm,理论塔板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于4 000[3]。

　　3.3.2  对照品溶液的制备 

　　精密称取盐酸麻黄碱对照品10 mg,置100 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取5 mL,置25 mL量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,即得(每1 mL含盐酸麻黄碱20 μg)。

　　3.3.3  供试品溶液的制备 

　　精密量取本品2 mL,加5 mol/L氢氧化钠溶液120 mL,摇匀；加氯化钠7.5 g,振摇,蒸馏,用预先盛有0.5 mol/L盐酸溶液5 mL的100 mL量瓶收集蒸馏液近95 mL,加水至刻度,摇匀,即得。

　　3.3.4  阴性对照溶液的制备 

　　按处方制法制备不含麻黄的阴性样品,按供试品溶液制备方法制备成阴性对照溶液。

　　3.3.5  阴性干扰试验 

　　在选定的色谱条件下,分别取盐酸麻黄碱对照品溶液、样品溶液和缺麻黄的阴性样品溶液各10 μL,注入液相色谱仪,测定,阴性样品在对照品位置无干扰峰。

　　3.3.6  线性关系考察  精密吸取盐酸麻黄碱对照品溶液1、2、4、8、10 μL分别注入液相色谱仪,测定盐酸麻黄碱色谱峰面积。以盐酸麻黄碱的进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,进行线性回归,得回归方程：Y＝-33 537.552 6＋2 274 701.891 2X (r＝0.999 6,n＝5)。结果表明：盐酸麻黄碱在0.020 0～0.200 0 μg之间线性关系良好。

　　3.3.7  精密度试验 
　　
　　精密吸取同一供试品溶液10 μL,重复进样6次,分别计算盐酸麻黄碱的峰面积,结果其RSD＝1.44%。

　　3.3.8  稳定性试验 

　　精密吸取对照品溶液10 μL,分别于0、2、4、8、24 h(n＝5)测定峰面积,计算得盐酸麻黄碱峰面积的RSD＝1.61%,表明对照品盐酸麻黄碱在24 h内稳定。

　　3.3.9  重复性试验 

　　取样品,精密称定5份,制备供试品溶液,进样测定,计算盐酸麻黄碱的质量分数,RSD＝1.58%。平均含量为151.2 μg/mL。

　　3.3.10  加样回收率试验 

　　采用加样回收法。取样品5份,每份1 mL,置具塞锥形瓶中,各精密加入盐酸麻黄碱对照品100 μg,制备供试品溶液,进样测定。结果见表1。盐酸麻黄碱平均加样回收率为99.22%,RSD＝1.57%。 表1  盐酸麻黄碱加样回收率试验结果(略)

　　3.3.11  样品测定 

　　取3批麻杏止咳合剂制备供试品溶液,按上述色谱条件及测定方法进行含量测定,3批样品平行测定3次。样品中盐酸麻黄碱含量测定结果见表2。 表2  样品含量测定结果(略)

    因麻黄产地和采收季节不同,药材中有效成分差异较大,根据结果,暂定本品每1 mL含麻黄以盐酸麻黄碱(C10H15NO·HCl)计,不得少于130.0 μg。

　　4  讨论

    该制剂处方合理,制备方法简单,经多年临床应用疗效确切。质量标准检测方法中对君药麻黄进行含量检测,可以控制盐酸麻黄碱的含量,有效减少盐酸麻黄碱使用剂量不当引起的临床不良反应。采用2005年版《中华人民共和国药典》中的流动相[1],盐酸麻黄碱的色谱峰不能很好分离,而采用以乙腈- 0.1%磷酸溶液(含0.1%三乙胺)(5∶95)为流动相后,盐酸麻黄碱色谱峰得到了很好的分离,并且峰形良好,可有效控制该制剂的质量。

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.附录31、33.

　　[2] 殷红妹.复方金银花合剂的质量标准研究[J].医药导报,2006,25(8)：834.

　　[3] 汤宏敏,罗国安,王义明,等.RP-HPLC法测定肺安片中盐酸麻黄碱含量[J].药学进展,2007,31(10)：462－464.