高效液相色谱法测定复方替硝唑醇溶液中两组分含量

　　摘　要　目的：建立同时测定复方替硝唑醇溶液中替硝唑和氯霉素含量的高效液相色谱法。方法：采用YWG-C₁₈柱，以甲醇-水-冰醋酸(35∶65∶0.1)为流动相，检测波长290nm，内标法定量。结果：替硝唑和氯霉素在20～120μg^.ml^-1的范围内呈良好线性关系。两者的平均回收率分别为100.6%±0.5%和99.5%±0.5%，日内及日间RSD<3%。结论：本方法准确、灵敏，适用于复方替硝唑醇溶液的质量控制。
关键词　高效液相色谱法；复方替硝唑醇溶液；替硝唑；氯霉素
中图分类号　R927.2

DETERMINATION OF TINIDAZOLE AND CHLORAMPHENICOL IN COMPOUND TINIDAZOLE TINCTURE BY HPLC

Xia Dongya,Ma Yan,Guo Tao,Zong Wentao
（Department of Pharmacy,General Hospital of Shenyang Military Region,
Shenyang　110015）

　　Abstract　AIMTo simultaneously determine tinidazole and chloramphenicol in compound tinidazole ticture by HPLC.METHODS The YWG-C₁₈ cloumn was used and the mixture of methanol-water-acetic acid glacial(35∶65∶0.1)was used as mobile phase with the detection wavelenth of 290 nm.RESULTSThe linear curve range of tinidazole and chloramphenical was 20～120μg^.ml^-1.The average recovery of tinidazole and Chloramphenicol was 100.6%±0.5% and 99.5%±0.5%,respectively.The RSD of inter-day and intra-day was less than 3%.CONCLUSIONThe method is simple,accurate and suitable for the qualify control of the two components in compound tinidazole ticture.
Key words　HPLC;compound tinidazole tincture;tinidazole;chloramphenicol

　　复方替硝唑醇溶液是我院研制的一种外用制剂，经皮肤科临床试用，治疗痤疮、酒渣鼻等疗效较好。该制剂主要含替硝唑和氯霉素，在研制过程中，为控制制剂质量，我们建立了同时测定复方替硝唑醇溶液中替硝唑和氯霉素含量的高效液相色谱法。

1　材料与方法

1.1　仪器　药品和试剂　Waters高效液相色谱仪系统：M510泵，486型可变波长紫外检测器，U6K进样器，746型数据处理机(美国Waters公司)。复方替硝唑醇溶液(本院制剂室，批号见表1，规格100ml含替硝唑1.0g，氯霉素1.0%g)；替硝唑精制品(湖北广济药业有限公司)；氯霉素精制品(东北制药总厂)；苯甲酸(镇江化工厂)，甲醇为色谱醇(山东省禹王实业总公司化学试剂厂)；水为亚沸蒸馏水，其余试剂为分析纯。
1.2　标准储备液配制　精密称取替硝唑精制品、氯霉素精制品及苯甲酸适量，分别用无水乙醇溶解后定容，配成浓度为1.00mg^.ml^-1的储备液，替硝唑置避光处，氯霉素及苯甲酸置冰箱4℃保存。
1.3　色谱条件　色谱柱为YWG-G₁₈ 10μm，5mm×150mm(中国科学院大连化学物理所)；流动相为甲醇-水-冰醋酸(35∶65∶0.1)，流速1.2ml^.min^-1；紫外检测波长290nm，灵敏度0.01AUFS；进样量10μl。
1.4　样品测定　精密量取复方替硝唑醇溶液5.0ml，置100ml量瓶中，用75%乙醇稀释至刻度，混匀。再精密量取上述稀释液5.0ml置25ml量瓶中，加内标液5.0ml，用流动相稀释至刻度，混匀进样测定。计算样品峰与内标峰的面积比，分别按照各自的标准曲线回归方程计算替硝唑和氯霉素的含量。

2　结　果

2.1　色谱行为　在上述色谱条件下，替硝唑、氯霉素与内标峰得到良好分离，空白制剂对测定无干扰。替硝唑、氯霉素及内标的保留时间分别为4.0min、8.6min和12.3min,见图1。

图1　复方替硝唑醇溶液色谱图

A 空白制剂；B 样品；1 替硝唑，2 氯霉素，3 内标

2.2　标准曲线　取空白制剂7份，分别加入不同量的替硝唑标准液和氯霉素标准液，再加入内标液各5.0ml，用无水乙醇稀释并定容至50ml，使替硝唑及氯霉素浓度分别为0、20、40、60、80、100、120μg^.ml^-1。进样测定以样品峰对内标峰的面积比As/Ai为横坐标，样品浓度C(μg^.ml^-1)为纵坐标进行回归，标准曲线回归方程为
替硝唑C=27.917 0As/Ai+0.259 2,r=0.999 8;
氯霉素C=27.113 3 As/Ai+1.243 4,r=0.999 7。
2.3　回收率实验　取替硝唑标准液和氯霉素标准液，按处方比例配制成含有复方替硝唑醇溶液的标准样品5份，按照“样品测定”项下操作，测定回收率。替硝唑和氯霉素的平均回收率分别为100.6%±0.5%和99.5%±0.5%。
2.4　精密度实验　取替硝唑标准液和氯霉素标准液按处方比例配制成标准样品，按照“样品测定”项下操作。日内重复测定5次，日间重复测定5次。测得替硝唑和氯霉素的日内RSD分别为0.5%和0.6%；日间RSD分别为0.8%和2.7%。
2.5　样品测定　取5个批号的样品，分别按照“样品测定”项下操作，结果见表1。

表1　复方替硝唑醇溶液含量测定结果(±s，n=3)

批号

相当标示量(%)

替硝唑

氯霉素

970714

98.0±1.6

100.7±1.9

970715

99.3±0.8

101.3±1.3

970716

98.9±0.2

102.0±0.8

970717

100.0±1.1

102.2±0.2

970718

100.4±1.8

102.8±2.0

3　讨　论

3.1　替硝唑制剂的含量测定有分光光度法^［1］和高效液相色谱法^［2］。替硝唑和氯霉素的UV λ_max分别为317nm和287nm，可分别用分光光度法测定含量。同时测定两组分含量时，因替硝唑在287nm处，氯霉素在317nm处有吸收，吸收峰相互重叠而干扰。为此，我们采用高效液相色谱法，有关替硝唑复方制剂含量测定的高效液相色谱法未见报道。
3.2　复方替硝唑醇溶液处方中替硝唑和氯霉素的含量相等，通过对替硝唑和氯霉素吸收光谱曲线的分析，选择替硝唑和氯霉素吸收度相等的290nm为检测波长，以使两组分的检测灵敏度一致。实验中发现，流动相中甲醇与水的比例对保留时间和分离度有影响，当甲醇比例大于45%时两组分不能完全分离，降低甲醇比例，可改善分离度，但保留时间延长。经实验，我们选择甲醇-水(35∶65)，替硝唑、氯霉素及内标之间的分离度均大于2，分离效果满意，且色谱分析时间约15min。
3.3　本文所建立的方法可同时测定复方替硝唑醇溶液中的替硝唑和氯霉素含量。方法回收率高，测得的回收率>99%；精密度好，日内RSD<1%，日间RSD<3%。方法简便，样品无需特殊处理，故适用于复方替硝唑醇溶液的质量控制。

作者简介：夏东亚，男，副主任药师，全军临床药理专业组委员。
作者单位：夏东亚　马燕　郭涛　宗文涛（中国人民解放军沈阳军区总医院药剂科　沈阳　110015）

参考文献

1　湛建国，程泽能，张郁葱.复方替硝唑含漱剂的研制.中国药学杂志，1997；32(2)：94
2　李士敏，陈建，方玲等.替硝唑葡萄糖注射液的稳定性研究.中国医药工业杂志，1996；27(5)：216

(本文编辑　王绪明)
(1998-11-07收稿　1999-04-20修回)