离子对反相高效液相色谱法测定头孢三嗪、7-氨基头孢菌烷酸及7-氨基头孢烯三嗪酸的含量

(珠海丽珠集团丽珠制药厂化验室　519020)

　　摘要　　用四丁基溴化铵离子对试剂，在C₁₈色谱柱上同时测定头孢三嗪产品，7-氨基头孢菌烷酸原料及7-氨基头孢烯三嗪酸中间体的含量。流动相为乙腈—四丁基溴化铵—pH 7.0磷酸盐缓冲液—水(32∶0.32∶4.4∶63.6)，检测波长270 nm。结果表明：7-氨基头孢菌烷酸浓度在9.36～234 μg/mL，7-氨基头孢烯三嗪酸浓度在10.4～260 μg/mL，头孢三嗪浓度在12.92～323 μg/mL的范围均存在良好的线性关系，回收率分别在99.7 %～99.9 %，99.5 %～99.8 %，100.0 %～100.4 %。
关键词：反相高效液相色谱法　头孢三嗪　7-氨基头孢菌烷酸　7-氨基头孢烯三嗪酸

　　头孢三嗪(ceftriaxone,CFT)是近年来合成的第三代头孢类超广谱抗菌药。在临床上广泛应用。在生产中，同时测定原料和中间体对优化反应条件，提高成品收率有十分重要的意义。有关头孢三嗪含量的测定方法已有报道^［1～3］，根据现有实验条件，我们建立了一个简便可行的新方法。本法不仅可以测定CFT含量，同时还可以测定原料7-氨基头孢菌烷酸(7-ACA)的含量并对中间体7-氨基头孢烯三嗪酸(7-ACT)的含量进行监控。
1　仪器与试药
　　惠普1050高效液相色谱仪，二极管阵列检测器，磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、四丁基溴化铵均为分析纯，乙腈为色谱纯，水为高纯水，7-ACA、7-ACT、CFT对照品(含量按无水物计分别为100.0 %、99.2 %、91.7 %)和样品均由丽珠合成药厂提供。
　　流动相配制：取四丁基溴化铵3.2 g，加乙腈320 mL溶解后，再加pH 7.0磷酸盐缓冲液44 mL，加水至1000 mL，混匀，抽滤即得。
2　色谱条件
色谱柱：天津特纳仪器公司kromasil C₁₈(4.6 mm×200 mm，5μm)，流动相：乙腈—四丁基溴化铵—pH 7.0磷酸盐缓冲液—水(32∶0.32∶4.4∶63.6)，检测波长270 nm，流速1.0 mL/min，柱温：室温，进样量10 μL。7-ACA、7-ACT、CFT在上述条件下的分离见图1—A。

图1　对照品(A)与样品(B)色谱图
1.7-ACA　2.7-ACT　3.CFT

3　线性关系考察
　　分别精密称定7-ACA、7-ACT、CFT对照品23.4、26.0和32.3 mg，置同一100 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取1、2、3、5、7、10 mL置25 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密量取10 μL注入色谱仪，记录峰面积，得回归方程分别为：
Y_7-ACA＝1.495×10³X+1.296　r＝1.000
YY_7-ACT＝2.766×10³X+8.294　r＝0.99999
YY_CFT＝2.418×10³X+8.827　r＝0.99999
结果表明：7-ACA浓度在9.36～234 μg/mL，7-ACT浓度在10.4～260 μg/mL，CFT浓度在12.92～323 μg/mL的范围存在良好的线性关系。
4　回收试验
　　取已准确测定含量的样品液，分别向其中加入已知量的标准液，混匀后定量，求得7-ACA、7-ACT、CFT的6次平均回收率分别为99.8 %、99.7 %、100.3 %，RSD分别为0.1 %、0.2 %、0.1 %。
5　样品测定
分别精密称取样品7-ACA、7-ACT、CFT各约20 mg置同一100 mL容量瓶中，加流动相溶解稀释至刻度，摇匀。精密量取2 mL置25 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取10 μL注入色谱仪，记录峰面积，用相应的标准曲线计算含量。样品色谱图见图1—B。测得7-ACA、7-ACT、CFT的平均含量(n=3)分别为100.1 %、98.9 %、91.6 %。RSD分别为0.1 %、0.15 %、0.15 %。
6　讨论
6.1　CFT为羧基化合物，具有一定极性，在C₁₈色谱柱上难以保留。四丁基溴化铵能与CFT分子形成低极性的离子对缔合体，可增加被测组分的容量因子K′，使其在C₁₈柱上得以保留。流动相中有机相乙腈比例减少，K′增加，各峰保留时间延长，乙腈比例增加，K′降低，各峰保留时间缩短，影响分离。经优化选择，当水相中磷酸盐缓冲液pH等于7.0且乙腈比例为32 %时，各峰有较好分离。按本文的色谱条件，用C₈色谱柱测定，也能得到满意的分离效果。
6.2　试验表明：CFT、7-ACA、7-ACT均降解。其降解产物也能得到有效分离，这些降解物的结构有待进一步研究。

参考文献
1　姜雄平.反相离子对色谱法(IPC)测定头孢三嗪的含量.药物分析杂志，1995，15(6)：25
2　USP.ⅩⅩⅢ.314
3　中华人民共和国卫生部标准(试行).WS—009(X—9)—92

(本文于1997年4月21日收到)

Determination of Ceftriaxone(CFT),7-ACA and

7-ACT by Ion-pair RP-HPLC

Zhang Weixin,Jiang Chungang and Guo Guoling

(Quality Inspection Laboratory of Livzon Pharmaceutical Factory,Livzon Group,Zhuhai,519020)

　　Abstract:In this paper,a reversed-phase HPLC method on ODS column with tetrabutyl ammonium bromide as ion-pair agent was developed for the quantitative analysis of CFT,7-ACA and 7-ACT.The mobile phase was acetonitrile-tetrabutyl ammonium bromide-pH 7.0 phosphate buffer-water(32∶0.32∶4.4∶63.6).The eluant was detected at 270 nm,over the concentration range 9.36～234 μg/mL of 7-ACA，10.4～260 μg/mL of 7-ACT and 12.92～323 μg/mL of CFT,respectively.The calibration curves were linear.The average recovery was the range of 99.7 %～99.9 % of 7-ACA，99.5 %～99.8 % of 7-ACT and 100.0 %～100.4 %of CFT respectively.
　　Key words:RP-HPLC,CFT,7-ACA,7-ACT