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摘 要: 目的:建立新的HPLC分离测定氨苄西林及其降解产物的方法。方法:色谱条件为:Nova-Pak C18色谱柱;0.02 mol.L-1磷酸二氢钠溶液(pH4.5)-乙腈(95∶5)为流动相;检测波长为230 nm。 结果:在0.24~1.20 mg.ml-1的浓度范围内线性关系良好,r=0.9991,平均回收率为100.6%(n=5),RSD=0.47%,重复进样RSD=0.06%(n=5),氨苄西林及其降解产物得到基线分离。 结论:本法简便、快速、准确,适用于氨苄西林的含量测定及其降解产物的检查。 Determination of ampicillin and its degradation products by means of HPLC Qian Yaping Qian YP Wang Jian Wang J Miao Huarong Miao HR ABSTRACT:OBJECTIVE:To develop a new HPLC
method for the isolation and determination of ampicillin and its dergadation
products.METHODS:Chromatographed conditions included column:Nova-Pak C18;mobile
phase:0.02 mol.L-1 monobasic sodium phosphate (NaH2PO4)
solution (pH4.5)-acetonitrile (95∶5);detection wave-lengths at 230 nm.RESULTS:There was a
good linear relationship over the range of 0.24~1.20 mg.ml-1,r=0.9991.The
average recovery was 100.6% with RSD 0.47%(n=5).The RSDfor repetition was 0.06%(n=5),ampicillin and its degradation
products were isolated on base line.CONCLUSION:The method was simple,rapid,accurate and
can be used to assay ampicillin and its degradation prouducts. 氨苄西林(氨苄青霉素)为β-内酰胺类抗生素,对革兰阳性、阴性菌有较强的抑制作用,临床应用较广。中国药典1995年版二部、美国药典ⅩⅩⅢ版、英国药典1993年版均有收载,其质量控制方法相应为硫醇汞盐紫外分光光度法,HPLC,电位滴定法。分光法、电位法,操作繁琐,分析周期长,专属性不够好,且汞盐毒性较大。本文采用HPLC分离测定了氨苄西林及其降解产物,结果满意。 1 仪器与试药 日本岛津LC-6A高效液相色谱仪,SPD-6N紫外-可见检测器,C-R4A色谱数据处理机。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱:大连化学物理研究所Nova-Pak C18(4.6 mm×200 mm,4 μm);流动相:0.02 mol。L-1磷酸二氢钠溶液(pH4.5)-乙腈(95∶5),薄膜(0.5 μm)过滤并脱气;检测波长为230 nm;流速:1.3 ml。min-1;灵敏度:0.08 AUFS;进样量:20 μl。 2.2 系统适用性试验 碱性降解产物的制备:称取氨苄西林对照品,用0.01
mol。L-1氢氧化钠溶液制成0.6 mg。ml-1溶液,放置30
min,然后用磷酸调节溶液pH值至(4.5±0.1),量取5 ml置25 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,即得。 2.3 线性关系 精密称取氨苄西林对照品适量,用流动相制成2.4 mg。ml-1溶液,精密量取1,2,3,4,5 ml分别置10 ml量瓶中,用流动相定容,摇匀。在上述色谱条件下各进样20 μl测定。结果氨苄西林在0.24~1.20 mg。ml-1的浓度范围内峰面积(A)与浓度(c,mg。ml-1)线性关系良好,回收方程为:A=201690c+5050,r=0.9991。 2.4 精密度试验 取氨苄西林对照品,用流动相制成0.6 mg。ml-1溶液,在上述色谱条件下重复进样5次,峰面积的RSD为0.06%,精密度良好。 |
图1 氨苄西林及其降解产物、样品分离图 2.5 重现性试验 精密称取同一批号样品5份,按样品测定方法操作。结果RSD为0.40%。 2.6 回收率试验 精密称取已准确测定含量的注射用氨苄西林钠,准确加入适量氨苄西林对照品,用流动相溶解,按样品测定项下方法测定,结果见表1。 |
加入量/mg | 测定量/mg | 回收率/% | 平均回收率/% | RSD/% |
11.81 | 11.93 | 101.00 | ||
11.95 | 12.01 | 100.50 | 100.60 | 0.47 |
12.01 | 11.99 | 99.80 | ||
12.12 | 12.19 | 100.60 | ||
12.24 | 12.35 | 100.90 |
2.7 样品测定 精密称取注射用氨苄西林钠样品3批各适量,分别用流动相稀释成0.6 mg。ml-1溶液,在上述色谱条件下进样测定。另精密称取氨苄西林对照品适量,同法稀释测定。以外标法计算含量,面积归一化法检查降解产物,结果见表2。 表2 样品测定结果.n=3 |
批号 | 含量/% | RSD/% | 降解产物/% |
961210 | 86.97 | 0.18 | 0.79 |
961248 | 86.28 | 0.15 | 0.84 |
970302 | 87.09 | 0.11 | 0.77 |
3 讨 论 3.1 考察了流动相中乙腈量对氨苄西林保留时间的影响。乙腈量减少,保留时间延长,以5%配比,保留时间较合适。 作者单位:钱亚萍(嘉兴314001嘉兴市药品检验所) 收稿日期:1998-08-31 |