高效液相色谱法同时测定奥湿克片中两组分的含量及有关物质

摘　要：目的：测定奥湿克片中米索前列醇和双氯芬酸钠的含量及有关物质。

方法：采用RP-HPLC，用岛津Shim-Pack CLC-C₈柱(4.6 mm×15 mm,5 μm)；流动相：乙腈-甲醇-pH 3.0 缓冲液(22∶36∶42)，检测波长：200 nm，有关物质B型米索前列醇(SC-33188)280 nm。

结果：米索前列醇和双氯芬酸钠分别在10.2～163.2 μg^．ml^-1(r=0.9995，n=9)和1.29～20.6 μg^．ml^-1(r=0.9997,n=9)浓度范围内呈线性关系。米索前列醇和双氯芬酸钠的平均回收率(n=6)分别为100.0%，100.6%；RSD分别为0.6%，0.7%，同时测定米索前列醇的有关物质。

结论：方法简便、准确。

RP-HPLC simultaneouly determination of diclofenac sodium,misoprostol and its related impurities in compound misoprostol tablet

Ye Hao (Ye H)　Zhang Mei (Zhang M)
(Shanghai Institute For Drug Control,Shanghai 200233)

ABSTRACT：OBJECTIVE：To develop an assay for the determination of diclofenac sodium,misoprostol and misoprostol related impurities in compound misoprostol tablet.METHODS：A RP-HPLC was used on Shim-Pack CLC-C₈ column with a mobile phase of acetonitrile-methanol-pH 3.0 triethylamine buffer(22∶36∶42) and the detection wavelength at 200 nm(SC-33188 at 280 nm).RESULTS：The standard curves for misoprostol and diclofenac sodium were linear over the range of 10.2～163.2 μg^．*ml^-1(r=0.9995,n=9);1.29～20.6 μg^．ml^-1(r=0.9997,n=9),respectively.The average recoveries of misoprostol and diclofenac sodium were 100.0%,100.6%;with RSD 0.6%,0.7%,respectively.Diclofenac sodium,misoprostol and its related impurities could be determined simultaneously.CONCLUSION：The method is convenient,accurate and precise.
KEY　WORDS：HPLC,compound Arthrotec^ tablet,misoprostol,diclofenac sodium,misoprostol related impurities▲

　　奥湿克片为美国西尔Searle公司的产品，是一种含胃和十二指肠粘膜保护剂的非类固醇消炎药物，每片奥湿克片含双氯芬酸钠50 mg和米索前列醇200 μg。在临床试验中服用奥湿克片所产生的胃肠道不良反应率明显少于分别服用双氯芬酸钠和米索前列醇。厂方提供的质量标准中，用两种HPLC不同的色谱条件测定米索前列醇的含量及有关物质和双氯芬酸钠的含量，在实际操作中比较麻烦。为此我们试通过寻找适宜的色谱条件，用HPLC同时测定两组分的含量及米索前列醇的有关物质，方法简便、准确，重复性好。

1　仪器与试药

　　日本岛津LC-10A 高效液相色谱化学工作站，SIL-10A自动进样仪，SPD-10A紫外检测器。对照品：双氯芬酸钠，米索前列醇及其各有关物质(美国西尔药厂，纯度均按100.0%计算)。乙腈、甲醇均为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

2　色谱条件

　　色谱柱：岛津Shim-Pack CLC-C₈柱(4.6 mm×15 mm,5 μm)；流动相：乙腈-甲醇-pH 3.0缓冲液(22∶36∶42)，pH 3.0缓冲液为1%三乙胺溶液用磷酸调节pH至3.0。检测波长：200 nm，有关物质B型米索前列醇(SC-33188)检测波长为280 nm，流速为1.8 ml^.min^-1。

3　对照溶液的配制

3.1　主成分对照储备液　精密称取双氯芬酸钠32 mg置50 ml量瓶中，加溶剂(均为乙腈-水=1∶1)溶解并稀释至刻度；另精密称取米索前列醇50 mg置50 ml量瓶中，加少量溶剂溶解，精密加入上述双氯芬酸钠溶液10 ml，加溶剂稀释至刻度，摇匀，备用。
3.2　米索前列醇有关物质的对照储备液　精密称取米索前列醇有关物质A型米索前列醇(SC-29636)，8-Z型米索前列醇(SC-32759)，B型米索前列醇(SC-33188)各10 mg置同一100 ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，再精密量取5 ml置20 ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，备用。
3.3　对照溶液　精密量取主成分对照储备液2.0 ml，米索前列醇有关物质的对照储备液1.0 ml置同一25 ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

4　线性范围

　　精密量取主成分对照储备液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0 ml置50 ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，进样100 μl。以峰面积为纵坐标Y，浓度为横坐标X，结果为：
双氯芬酸钠：Y=25001+345839 X　r=0.9997　n=9,浓度范围1.29～20.6 μg^.ml^-1；
米索前列醇：Y=30943+32887 X　r=0.9995　n=9，浓度范围10.2～163.2 μg^.ml^-1。

5　精密度试验

　　精密量取对照溶液100 μl，重复进样6次，结果双氯芬酸钠和米索前列醇RSD分别为：1.1%和1.2%，有关物质A型米索前列醇，8-Z型米索前列醇，B型米索前列醇RSD分别为：1.4%，1.2%，0.74%。

6　回收率试验

　　取复方米索前列醇10片，片芯置100 ml量瓶中，加甲醇40 ml，振摇20 min，再加溶剂稀释至刻度。精密吸取5 ml置50 ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，再取2 ml置100 ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，备用。10 个片的外层物置100 ml量瓶中，加入25 ml上述片芯溶液，振摇30 min，静置30 min，过滤，作为样品溶液。精密吸取样品溶液5，10，15 ml，加入含双氯芬酸钠20.6 μg^.ml^-1和米索前列醇163.2 μg^.ml^-1的溶液5 ml，置20 ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度。精密量取上述3种溶液及对照溶液各100 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算各组分的含量，求得平均回收率双氯芬酸钠100.6% (n=6)，RSD为0.7%；米索前列醇100.0%(n=6)，RSD为0.6%。

7　样品的测定

　　取复方米索前列醇10片，照“6”项操作，按外标法以峰面积计算各组分的含量，以及米索前列醇的有关物质相对米索前列醇的含量(图1，2)，并将结果与厂方提供的质量标准法进行比较，见表1，2。

表1　双氯芬酸钠和米索前列醇的含量测定结果.%

表2　米索前列醇的有关物质测定结果.%

图1　样品含量和有关物质色谱图
测定波长200 nm；1-双氯芬酸钠；2-SC-32759；3-米索前列醇；4-SC-29636；5-SC-33188(不做测定)

图2　有关物质色谱图
测定波长280 nm；1-双氯芬酸钠；2-米索前列醇；3-SC-33188(有关物质-280 nm)

8　米索前列醇的有关物质最低检测浓度的测定

　　精密量取对照溶液用溶剂稀释成不同浓度的溶液各100 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，测定可检测到的最低浓度，作为最低检测浓度。测定了6个不同浓度的溶液，结果有关物质A型米索前列醇，8-Z型米索前列醇，B型米索前列醇的最低检测浓度分别为：0.102，0.124，0.0023 μg^.ml^-1，相对米索前列醇的含量分别为：0.13%，0.16%，0.028%，而厂方提供的质量标准限度分别为1.2%，1.0%，0.5%，说明用本法完全可以达到要求。

9　讨　论

9.1　流动相系统的选择　试验多种不同配比的流动相系统，结果表明乙腈-甲醇-pH 3.0缓冲液(22∶36∶42)，此流动相系统分离效果最好。两主成分的分离度为5.4，米索前列醇与有关物质8-Z型米索前列醇的分离度为2.4 (厂方提供的质量标准要求为1.25)，双氯芬酸钠与米索前列醇有关物质8-Z型米索前列醇的分离度为2.6。从图可见，米索前列醇的另两个有关物质A型米索前列醇，B型米索前列醇与两组分分离度更大，说明米索前列醇的有关物质对两组分能一同测定。
9.2　pH条件的选择　厂方提供的质量标准其流动相系统对柱效的影响比较大，试验多种不同pH条件：pH=2.0，2.5，3.0，3.5缓冲液系统，选用pH3.0缓冲溶液峰型较佳，且5个所要测定的峰能在20 min全部出尽，试验前后理论塔板数变化不大。
9.3　样品溶液在24 h中两组分峰面积基本不变，溶液稳定。片外层物(含米索前列醇部分)吸水性较强，暴露空气中片子很快裂开，故产品应低温干燥储藏。■

作者单位：叶皓(上海市药品检验所，上海，200233)
张玫(上海市药品检验所，上海，200233)

收稿日期：1999-09-09