胶束电动毛细管色谱法分离酮康唑手性异构体

1　引　　言

　　胶束电动毛细管色谱法（MECC）综合了反相高效液相色谱的分配机理和毛细管区带电泳的电渗及电泳机理，实现了对电中性物的分离。由于环糊精（CD）外表面具有亲水性，当其与胶束共存时，不能进入胶束，所以溶液存在三相即：胶束相、水相和CD相。异构体通过与CD形成不同稳定常数的主-客体络合物而达到手性识别，由于十二烷基硫酸钠（SDS）的高疏水性，该方法对分离电中性和疏水性化合物具有突出的优越性。
　　酮康唑(ketoconazole)属口服咪唑类抗真菌合成药物，到目前为止，人们对其它手性药物拆分进行了较多的研究，但对酮康唑的研究尚未见报道，为此，我们研究了不同类型环糊精对酮康唑的手性识别作用，并讨论了CD、SDS浓度及酸度等对分离酮康唑手性异构体的影响。

2　实验部分

2．1　仪器与试剂　高效毛细管电泳仪（实验室组装）；pH-25型酸度计（上海雷磁仪器厂）；弹性石英毛细管柱（60cm×75μm i.d，有效长度为50cm，河北永年光导纤维厂）；SDS、α-CD（Sigma公司）、β-CD（Sigma公司）；其它试剂均为分析纯试剂；所用水为二次石英亚沸蒸馏水；酮康唑外消旋体购自药店。缓冲溶液（40　mmol／L硼砂和30　mmol／L　SDS）经0.25　μm混合纤维素酯微孔滤膜过滤后使用。
2．2　试验步骤　毛细管用0.5 mol/L NaOH和水各洗涤半小时，然后用运行缓冲液平衡20 min，两次进样之间，分别用0.1 mol/L NaOH、水各清洗2 min，然后再用缓冲液清洗5 min。
　　以硼砂-CD-SDS为分离介质，样品以甲醇溶解并经0.25　μm微孔膜过滤，样品浓度为0.5　g／L；在3　kV电渗进样5s；检测波长为214　nm。

3　结果与讨论

3．1　不同类型CD的手性识别作用　不同的CD，其空腔尺寸也不同，因而对不同手性药物的分离选择性也不同。我们在30 mmol/L SDS-40mmol／L硼砂溶液中分别加入10　mmol／L的α-CD和β-CD，对酮康唑消旋体进行了分离。结果表明α-CD对手性异构体无拆分作用，这可能是由于α-CD的空腔较小，对溶质分子的迁移影响较小所致。而10　mmol／L的β-CD对手性异构体可达到完好分离。
3．2　SDS浓度对分离的影响　为研究不同的SDS浓度对分离的影响，在40 mmol/L硼砂（pH＝9.30）＋10 mmol/L β-CD体系中，加入不同量的SDS，结果表明当SDS浓度在临界胶束浓度（8mmol/L）以下时，由于不能形成胶束，溶质随电渗流一起流出，异构体不能被分离；当SDS浓度为25～35 mmol/L时，分离度最大为1.10；当SDS浓度超过35mmol/L时，由于CD相对于SDS的浓度比值大大降低，溶质迁移速度变快，所以Rs下降。因此我们选择SDS的最佳分离浓度为30mmol/L。
3．3　β-CD浓度对分离的影响　酮康唑对映体是通过与CD形成不同稳定常数的化合物而分离的，因此CD的浓度对分离度Rs有决定性的影响。为此，我们在40 mmol/L硼砂＋30 mmol/L SDS体系中加入不同浓度的β-CD来考察分离度的变化情况，结果表明，当β-CD浓度为0　mmol／L时，异构体不能被分离；随β－CD浓度的增加，异构体分离度也逐渐增加，当CD浓度为9～12　mmol／L时，分离度最大，达1.10；当β-CD浓度继续增加时，随着溶质在CD中的保留增加，其迁移速度加快，分离度变小。因此我们选CD的最佳浓度为10　mmol／L。
3．4　酸度对分离的影响　我们把硼砂电解质溶液的pH分别用硼砂和0.1 mol/L NaOH及0.1 mol/L HCl调至6～10范围来研究酸度对分离的影响。结果表明，当pH在8～10范围内消旋体得到最好的分离，这可能是由于在该酸度范围内，CD相及胶束相的表观迁移速度差值较大所致。我们选最佳pH值为9.30。

李关宾（山东轻工业学院化学工程系，济南 250100）
蒋文强（山东轻工业学院化学工程系，济南 250100）
主沉浮（山东轻工业学院化学工程系，济南 250100）
林秀丽(中国科学院大连化学物理研究所，大连　160011)
关亚风(中国科学院大连化学物理研究所，大连　160011)