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摘 要：采用高效毛细管电泳安培法对扑热息痛及其水解物对氨基酚的测定进行了研究。优化选择了工作电极、检测电位、缓冲溶液浓度等实验参数，并探讨了进样时间与峰电流的关系。结果表明：在优化的实验条件下扑热息痛和对氨基酚在6min内可以得到较好的分离，检出限分别为0.5μmol/L和1.0μmol/L。该法适合药物生产过程的质量控制和临床检测。
扑热息痛，又称为对乙酰胺基酚或潘那度尔，是一种酰胺类解热镇痛药。该药以硝基氯苯为原料水解还原或以酚为原料亚硝化及还原制得对氨基酚，再经过乙酰化制得。扑热息痛由于具有酰胺基结构，所以容易发生水解生成芳伯氨基。另外，在制备过程中乙酰化不完全也会引入对氨基酚。对氨基酚对人体有毒，必须严加控制[1]。用于扑热息痛检测的方法有经典的紫外分光光度法[2]，液相色谱法[3,4]，差示脉冲极谱法[5]。有人曾采用高效毛细管电泳法对扑热息痛及其水解物对氨基酚同时检测进行了研究[6]，但方法比较复杂，检出限不高，分离效果不理想；而且需要采用较为复杂的电化学预处理的碳纤维工作电极与较麻烦的Nafion接口和用三维可调平台将工作电极对准插入检测毛细管末端。我们采用自组装的高效毛细管电泳(HPCE)简易安培检测装置，以微碳糊电极作工作电极，克服了以上的不足，通过选择适当的分离压力和pH值，对扑热息痛及其水解物对氨基酚的同时检测进行了研究，提高了分离度和灵敏度，得到比较满意的结果。
1实验部分
1.1装置与药品、试剂
高效毛细管电泳安培检测装置(自行组装)[7]；CZE 30 PN10MCN Z2型高压电源(美国HighVoltageElectronicsCorp)DF86型伏安仪(中山大学化学系)微机采样器；石英毛细管（河北永年光纤厂)铂电极(自制)碳糊电极(自制)饱和甘汞电极(SCE,江苏电分析仪器厂)铂片辅助电极（上海电光器件厂)pHS－25型酸度计(上海雷磁仪器厂)JP3－1型示波极谱仪（山东电讯七厂)扑热息痛(分析纯)：广东药品检验所提供；对氨基酚(分析纯)：上海试剂二厂产品；NaH2PO4、Na2HPO4、H3PO4(分析纯)：广州化学试剂厂产品；所有溶液均用二次双蒸水配制。
1.2实验过程
分析纯扑热息痛及对氨基酚分别配制成所需的标准溶液。分离毛细管使用前依次用0.1mol/LNaOH、二次蒸馏水、缓冲溶液清洗，检测池、分离毛细管中装入相同的缓冲溶液，采用虹吸进样。进样后接上高压电源，进行分离检测。
2结果与讨论
2.1工作电极的选择
实验中比较了微铂电极和微碳糊电极对分析检测的影响。结果表明：毛细管电泳工作电极的检测电位高达0.96V(vsSCE)，在此高电位下微铂电极响应不稳定，因此选用碳糊电极作为工作电极。
2.2检测电位的选择
首先在JP3－1极谱仪上采用循环伏安法初步考察扑热息痛及对氨基酚的氧化还原情况。采用三电极体系，以碳糊电极作为工作电极，在磷酸盐缓冲溶液中扫描。结果表明(图1)：扑热息痛及对氨基酚在0.6～0.8V(vsSCE)有明显的不可逆氧化峰。从扑热息痛及对氨基酚的结构式看，扑热息痛具有酰胺基结构，对氨基酚具有芳伯氨基结构，都是容易氧化的基团。然后在电泳仪采用动态伏安法来选择最佳的工作电极检测电位（V），测定范围为0.56～1.26V(vsSCE),结果见图2。
图1 扑热息痛(a)、 对氨基酚(b)、 底液（c）的循环伏安图
Fig.1 Cyclic voltammograms of acetaminophen(a), p - amino- phenol(b)
and base solution(c)分析物浓度(analyte concentration): 1×10－3 mol/L;
底液(base solution): 30 mmol/L PBS＋16.7 mmol/L磷酸盐(phosphate),
pH=7.2; 扫描速度(scan rate): 400 mV/s
图2 扑热息痛(a)和对氨基酚(b)动态伏安图
Fig.2 Hydrodynamic voltammograms of acetaminophen(a) and p - aminophenol(b)
毛细管(capillary): id 25 μm×72 cm; 分离电压(separation voltage)
24 kV; 虹吸进样: 高度 10 cm, 时间10 s;
(sample injection by siphonage at 10 cm for 10 s) 其余条件同
图1(other detection conditions as in Fig.1)
从图2可以观察到，对氨基酚在0.96V(vsSCE)处具有最高的氧化电流，扑热息痛的最高氧化电流在1.16V(vsSCE),所以选择0.96V作为工作电极检测电位。
2.3缓冲溶液浓度的选择
实验选择弱碱性的磷酸盐缓冲液(pH=7.2)。固定缓冲溶液的pH值，改变缓冲溶液的浓度从60～10mmol/L，考察缓冲溶液浓度对分离的影响。结果表明：随着缓冲溶液浓度的增大，扑热息痛和对氨基酚的迁移时间不断增加。这可能是由于缓冲溶液浓度增大，分析物的毛细管电渗流淌度μeo减小，有效电泳淌度μef基本不变(pH值一定)，因此表观电泳淌度(μap=μeo＋μef)呈减小的趋势,导致分析物的迁移时间增加，分离度提高;但另一方面，缓冲溶液浓度增大，噪声也增大。为了达到较好的基线分离和缩短分析时间，实验选用的缓冲溶液浓度为20mmol/L。图3为缓冲溶液浓度与扑热息痛和对氨基酚的迁移时间关系。
图3 缓冲溶液浓度与分析物迁移时间关系
Fig.3 Relationship between buffer concentration and migration time of analytes
1. 对氨基酚（p-aminophenol)2． 扑热息痛（acetaminophen）
2.4进样时间与峰高的关系
实验探讨了不同进样时间与扑热息痛和对氨基酚的峰高的关系。配制一定浓度的扑热息痛和对氨基酚标准溶液，在最优化的实验条件下，测定不同进样时间下的峰高(峰电流，Ip)。结果(图4)表明：进样时间与氧化电流基本上呈线性关系。
图4 进样时间与峰电流的关系
Fig.4 Relationship between sampling time and peak current
1． 扑热息痛(acetaminophen) 2． 对氨基酚（p-aminophenol）
2.5线性范围和检出限
在优化的实验条件下，经实验测定扑热息痛和对氨基酚的线性范围和检出限如表1所示。
表1扑热息痛和对氨基酚检出限和线性范围
Table1 Detection limit and linear range for acetaminophen and p-aminophenol |