接骨灵巴布膏的质量标准研究

　　【摘要】  目的 建立接骨灵巴布膏的质量标准。方法 采用薄层层析对制剂中蒲公英、羌活进行鉴别，采用气相色谱法对制剂中樟脑、冰片、水杨酸甲酯进行鉴别，采用高效液相法测定制剂中柚皮苷的含量。结果 薄层层析和气相色谱法可鉴别出蒲公英、羌活、樟脑、冰片、水杨酸甲酯，柚皮苷在0.1004～0.502 μg范围内具有良好线性关系（r=0.9997），平均回收率为97.71%(RSD=1.04%)。结论 该方法简便可靠，重现性好，可用于该制剂的质量控制。

　　【关键词】  接骨灵巴布膏 质量标准 高效液相色谱法 薄层层析 气相色谱法

　　Quality control of Jieguling poultice

　　ZHAO Yanling, PAN Jinhuo

　　Nanjing University of Traditional Chinese Medicine,Nanjing,Jiangsu 210029,China

　　Abstract:Objective To establish the quality standard of Jieguling poultice.  Methods Herba taraxaci,Rhizoma et Radix notopterygii in Jieguling poultice were identified by TLC. Camphor,borneol and methyl salicylate were identified by GC. The content of naringin in Jieguling poultice was determined by HPLC. Results Herba taraxaci,Rhizoma et Radix notopterygii,camphor,borneol,methyl salicylate were all detected by TLC or GC. The calibration curve was linear in the range of 0.1004～0.502 μg of naringin (r=0.9997). The average recovery was 97.71% (RSD=1.04%). Conclusion The method is simple,reliable and reproducible for the  quality control of Jieguling poultice.

　　Key words:Jieguling poultice; quality standard; HPLC;  TLC;  GC

　　接骨灵巴布膏由骨碎补、蒲公英、羌活、冰片等十几味中药组成，具有续筋接骨，活血化瘀，舒筋通络，消肿止痛功效，用于跌打损伤，骨折中、后期及愈合缓慢者。方中骨碎补为君药，具有补肝肾、强筋骨、促进筋骨愈合的功效，骨碎补的活性成分是以柚皮苷为主的二氢黄酮类化合物。为提高药品质量，保证临床疗效，本文采用TLC法及GC法对制剂中蒲公英、羌活、冰片等进行定性鉴别 ，同时使用HPLC法测定了制剂中柚皮苷的含量，建立了可靠、准确、专属性强的质量控制方法。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器

　　Waters—515高效液相色谱仪、2487紫外检测器、Empower色谱工作站；HP—4890 气相色谱仪；FID检测器；紫外线双波长荧光分析灯。

　　1. 2  试药

　　硅胶G(青岛海洋化工厂，薄层色谱用)，咖啡酸（批号：0993—200203）、羌活对照药材（批号：0876—200001）、樟脑（批号：713—200405）、冰片（批号：763—200307）、水杨酸甲酯（批号：712—200407）、柚皮苷（批号：722—200107）均购自中国药品生物制品检定所，接骨灵巴布膏 (共3批，批号为050602,050623,050628，由苏州三江新医药科技有限公司提供)。薄层色谱鉴别阴性对照药材均自购，经鉴定符合《中国药典》2005年版(一部)收载的有关项下品种。所用试剂均为色谱纯或分析纯。

　　2  定性鉴别

　　2. 1  蒲公英的鉴别［1,2］

　　取本品2片，除去盖衬，加甲醇60 mL，加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水8  mL使溶解，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10  mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1  mL使溶解，作为供试品溶液。另取咖啡酸对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。另按处方比例，称取缺蒲公英的其他药材，按供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。照薄层层析(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述3种溶液各6 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯甲酸水(体积比7∶2.5∶2.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性液样品无此斑点，见图1。

　　2. 2  羌活的鉴别［3］

　　取本品2片，除去盖衬，加石油醚（60～90℃）60 mL，加热回流2 h，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液，另取羌活对照药材，按供试品溶液的制备方法，制得对照药材样品溶液，另按处方比例，称取缺羌活的其他药材，按供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。照薄层层析(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述3种溶液各6 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90 ℃）乙酸乙酯（体积比17∶5）为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性液样品无此斑点，见图2。

　　2.3  樟脑、冰片、水杨酸甲酯的鉴别

　　色谱条件：色谱柱为HPINNOWAX，汽化温度为250 ℃，检测器温度为250 ℃；气流量，氮气为60 mL/min-1、氢气为50 mL/min-1、空气为500 mL/ min-1；柱温，120 ℃保留11 min，每分钟40 ℃升至240 ℃保留11 min 。

　　取本品2片，除去盖衬，称取膏体约5 g，加无水乙醇25 mL，超声30 min，0.45 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。分别取樟脑、冰片、水杨酸甲酯制成每1 mL含1 mg的溶液作为对照品溶液，另取樟脑、冰片、水杨酸甲酯制成每1 mL各含1 mg的溶液作为混合对照品溶液。称取缺樟脑、冰片、水杨酸甲酯的其他药材，按供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。照气相色谱法（2005年版《中国药典》一部附录ⅥE）试验，分别吸取上述各溶液1 μL进样，按上述气相色谱条件测定，即得。在供试品色谱中，在与对照品色谱具有相同保留时间的峰，阴性样品溶液无干扰，见图3-5。

　　3  含量测定

　　3.1  色谱条件

　　AichromBondAQC18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相：以水相为流动相A，乙腈为流动相B，其中水相由水∶乙酸（体积比100∶1）组成，按流动相A∶流动相B（体积比84∶16）进行洗脱，检测波长为283 nm，柱温30 ℃，流速1 mL/min。

　　3.2  溶液的制备

　　3.2.1  对照品溶液的制备

　　精密称取在五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的柚皮苷对照品加甲醇制成每1 mL含0.502 mg的溶液，摇匀，精密量取1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度,摇匀，即得每1 mL含0.0502 mg的溶液。

　　3.2.2  供试品溶液的制备

　　取3个批号的巴布膏，每批取2片，共2份，精密称定，置100 mL锥形瓶中，加甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，密塞，称定重量，用甲醇补足重量，摇匀，滤过。精密吸取续滤液2.5 mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇定容到刻度，摇匀，备用。

　　3.2.3  阴性对照溶液的制备

　　按制备工艺制备缺骨碎补的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

　　3.3  系统适应性考察

　　分别吸取柚皮苷对照液和各供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，理论板数以柚皮苷峰计，不低于3 000，此时，柚皮苷峰与其他组分峰基线分离，分离度＞1.5，保留时间约为10.5 min。色谱图见图6-8。

　　3.4  线性关系考察

　　精密吸取浓度为0.0502 mg/mL的对照品溶液2.0 mL，4.0 mL，6.0 mL，8.0 mL，10.0 mL定容到10 mL容量瓶中，各进样10 μL，以柚皮苷平均峰面积（A）为纵坐标，进样量（m）为横坐标进行线性回归，得回归方程A=2.24×106m+22 158，r=0.9997，线性范围是0.1004～0.502 μg。

　　3.5  精密度试验

　　精密吸取浓度为0.0502 μg/μL对照品溶液10 μL，连续进样5次，结果柚皮苷峰面积值的RSD为1.27%。

　　3.6  稳定性试验

　　精密吸取批号为050628的供试品溶液10 μL，每间隔2 h进样测定，连续考察12 h，结果柚皮苷峰面积值的RSD为1.02%，表明在12 h内基本稳定。

　　3.7  重复性试验

　　取同一批号（050623）的样品，共5份，按样品测定项下的方法测定，测得样品中柚皮苷含量的RSD=1.83%，结果表明重复性良好。

　　3.8  加样回收率试验

　　取批号为050602的巴布膏除去盖衬，精密称定等量5份，分别置100 mL烧瓶中，各精密加入浓度为0.67 mg /mL的柚皮苷对照液10 mL，按“3.2.2”项下方法制得试液。精密吸取2.5 mL续滤液，定容于10 mL容量瓶中为供试溶液。吸取供试液10 μL注入液相色谱仪进行测定。结果见表1。表1  柚皮苷加样回收率试验（略）

　　3.9  样品测定

　　取3个批号的巴布膏适量,分别按“3.2.2”项下方法制成供试品溶液。按上述色谱条件,分别吸取10 μL注入液相色谱仪,采用随行标准，外标二点法定量，结果见表2。表2  样品含量测定结果（略）

　　4  讨论

　　本品处方复杂，药味较多，根据制剂中被检药材主要成分的特性，采用不同方法制备供试品溶液、阴性对照溶液、对照品溶液和展开剂，对制剂中蒲公英、羌活进行TLC法鉴别； 同时采用GC法，根据样品中各组分与对照品峰的保留时间，能够将制剂中樟脑、冰片、水杨酸甲酯同时检出，且3种组分在12  min内得以完全分离；并采用HPLC法对制剂的柚皮苷进行定量测定，方法重现性好，分析速度快，操作简便，可准确地进行质量控制。

　　【参考文献】

　　［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］.北京:化学工业出版社,2005.268.

　　［2］肖崇厚,杨松松,洪筱坤.中药化学［M］.上海:上海科学技术出版社,1997.346.

　　［3］陈师，农孙备，马玲，等. 千柏鼻炎颗粒质量标准的研究［J］.中国实验方剂学杂志，1999， 4(5):2