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【摘要】 目的对珊瑚姜中姜黄素进行定性定量研究。方法采用薄层色谱法对珊瑚姜中姜黄素进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对珊瑚姜中姜黄素进行含量测定。色谱柱为Hypersil BDS C18(250 mm×4.60 mm，5 μm), 流动相为乙腈-0.2%磷酸-三乙胺（50∶50∶0.1），检测波长420 nm，流速1.0 ml/min，柱温30℃。结果定性鉴别斑点清晰。姜黄素在0.201 8～1.009 0 μg范围内，进样量与峰面积呈良好线性关系，相关系数r=0.999 9(n=5)；姜黄素平均回收率为100.05%，RSD=1.55%(n=6)。结论对珊瑚姜中姜黄素进行了定性定量研究，方法简单可行，结果准确可靠。
【关键词】 珊瑚姜；姜黄素；薄层色谱；高效液相色谱
iber corallinum Hance
LIU Ying，HUO Xin，YANG Naijia，GAO Yuqiong，YUAN Yueling
（1.Guizhou Institute of Biotechnology Research and Development, Guiyang 550002, China; 2.Guiyang Medical College, Guiyang 550002,China)
Abstract：ObjectiveTo establish the quantitative and qualitative methods for curcumin in Zingiber corallinum Hance. MethodsCurcumin in Zingiber corallinum Hance was identified by TLC. The content of curcumin was determined by HPLC. The HPLC system consisted of ODS-C18, Acetonitrile-0.2％H3PO4- Triethyl amine (50:50:0.1)as mobile phase, flow rate of 1.0 ml/min and column tempreture of 30℃. The eluate was detected at 420nm.ResultsThe TLC sports developed were fairly clear. The control content of curcumin was within the range of 0.2018～1.009 0 μg, and there was a good linear relationship between the sample input and the peak area, the average recovery was 100.05%, r=0.999 9(n=6), RSD was 1.55%. ConclusionThe methoal is simple, accurate and reliable.It can be used for quantitative and qualitative determination of curcumin in Zingiber corallinum Hance.
Key words：Zingiber corallinum Hance； Curcumin； TLC； HPLC
珊瑚姜Zingiber corallinum Hance为姜科姜属植物珊瑚姜Zingiber corallinum Hance［1］，别名阴姜，主要分布于海南、广东、广西、贵州等省区［2］，生长于海拔500～1200 m的山坡林下，山谷阴湿处或密林中，根茎入药，具有清热、解毒、消肿、抗菌等功效。民间常用于治疗感冒、咳嗽、腰痛、腹痛、腹泻等诸症［3］。治疗食积胀满、脘腹疼痛、恶心呕吐、肝脾肿大和热风湿痛等症。药理研究证实珊瑚姜具有抑菌［4，5］、除螨［6］、抗阴道毛滴虫［7］的作用；姜黄素具有抗肿瘤［8］、抗抑郁［9］的作用。目前有关珊瑚姜中姜黄素的定性和定量方面研究还未见报道。本研究采用了薄层色谱法和高效液相色谱法对珊瑚姜中姜黄素进行定性鉴别和定量分析［10～12］，以期为初步建立珊瑚姜药材质量控制方法及其制剂的质量标准提供依据。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：岛津LC-10A液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，南宁威玛龙色谱工作站。色谱柱为Hypersil BDS C18(250 mm×4.60 mm，5μm)；姜黄素对照品（0823-9802）购自中国药品生物制品检定所；紫外可见分光光度计：TU-1800SPC；薄层用硅胶G板(青岛海洋化工厂分厂)。珊瑚姜药材产自贵州省安顺，经贵州大学生命科学院关萍老师鉴定为姜科姜属植物珊瑚姜Zingiber Corallinum Hance；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别取珊瑚姜药材粉碎成细粉，称取1 g,置磨口锥形瓶中，加入无水乙醇25 ml超声30 min，过滤，置水浴挥干，残渣加无水乙醇1 ml溶解作为供试品溶液，重复制备样品3份。另取姜黄素对照品加甲醇制成每毫升含1 mg的对照品溶液。照薄层色谱法［13］实验，吸取上述对照品溶液2 μl ，供试品溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G板薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲醇-甲酸（5∶4∶0.1∶0.05）为展开剂，展开，取出，晾干。在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。图略。
2.2 含量测定［13］
2.2.1 检测波长的选择经对姜黄素对照品溶液进行紫外扫描，发现在420 nm处有最大吸收峰。因此选择420 nm作为检测波长。见图1。
2.2.2 对照品溶液的制备
精密称取姜黄素对照品适量，加甲醇制成每毫升含60.54 μg的溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备
取本品粉末1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇25 ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液过0.45 μm的微孔滤膜，滤液作为供试品溶液。
2.2.4 色谱条件及含量测定
色谱柱为Hypersil BDS C18(250 mm×4.60 mm，5μm)，柱温30℃ ；流动相为乙腈-0.2%磷酸-三乙胺=50∶50∶0.1，流速1.0 ml·min-1，检测波长420 nm。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，进行含量测定。结果见图2～3。
2.2.5 线性关系考察
精密吸取姜黄素对照品溶液适量，共5份，分别置于10 ml量瓶中，加入甲醇至刻度，使质量浓度分别为20.18，40.36，60.54，80.72，100.90 μg/ml，各精密吸取l0 μl注入高效液相色谱仪，依法测定，以峰面积为纵坐标，姜黄素浓度为横坐标，绘制标准曲线，线性回归方程：A=105 579 C+87 614，r=0.999 9。结果表明，姜黄素在0.201 8～1.009 0 μg范围内具有良好的线性关系。
2.2.6 精密度考察
取同一对照品，分别重复进样6次，对照品溶液中姜黄素RSD=0.80%（n=6）。
2.2.7 重复性实验
取本品6份，精密称定样品，按“样品含量测定”项下的方法操作，制成供试品溶液，测定姜黄素的平均含量为1.66 mg/g，RSD为1.6%。
2.2.8 稳定性实验
将配置好的供试品溶液在室温下放置，分别于0，2，4，8，12h测定，结果样品溶液在12 h内基本稳定，RSD为1.14%。
2.2.9 加样回收率实验
精密称取已知含量的样品共6份，分别加入等量姜黄素对照品，照供试品方法制备，测定含量，姜黄素平均回收率为100.05%, RSD=1.55%(n=6) 。结果见表1。表1 姜黄素回收率实验结果（略）
2.2.10 珊瑚姜中姜黄素的含量测定
按“2.2.3”项下方法,制备供试品溶液,测定3份珊瑚姜药材中姜黄素的含量,测定结果见表2。表2 珊瑚姜中姜黄素的含量测定结果（略）
3 讨论
实验中采用姜黄素对照品溶液进行紫外扫描，发现420 nm有最大的吸收峰，故采用420 nm作为本实验的检测波长。
对提取溶剂进行考察，比较了95%乙醇、无水乙醇、甲醇、醋酸乙酯、氯仿、70%乙醇和50%乙醇的提取效果，含量测定结果显示,姜黄素在无水乙醇中提取效果较好；同时还采用石油醚和无水乙醇（1∶1）混合溶液、5%盐酸和无水乙醇(1:4)混合溶液、无水乙醇进行提取,对姜黄素进行含量测定。结果姜黄素含量没有明显差异，考虑到酸性过强对色谱柱的损害和石油醚对姜黄素的提取影响小，因此本实验采用无水乙醇进行提取。
对提取方法进行考察，比较了超声、加热回流和冷浸的提取效果,发现超声提取的姜黄素分离较好，达到基线回归,同时姜黄素的峰面积也明显大于其他两种提取方法,因此本实验的样品采用超声提取。
对超声提取时间进行考察，比较了0.5，0.75，1，1.25，1.5 h的超声提取效果,发现姜黄素在1～1.25 h内姜黄素的含量提高不明显,因此本实验的样品提取时间采用1 h。
目前对珊瑚姜药材的研究较少, 有关珊瑚姜定性和定量方面的研究还未见报道。本实验建立了珊瑚姜药材中的姜黄素的薄层鉴别及含量测定方法,且方法简单可行，重复性好,结果准确可靠,可为珊瑚姜药材及其制剂的质量标准的建立提供一定的参考。
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