高效液相色谱法法测定不同产地淫羊藿中淫羊藿苷的含量

　　【摘要】目的比较不同产地、不同品种的淫羊藿中淫羊藿苷含量差异。方法建立新的HPLC检测方法，测定其淫羊藿苷的含量。结果陕西汉中的淫羊藿中淫羊藿苷含量较高，朝鲜淫羊藿中淫羊藿苷含量最高，达到1.33%，是同产地的淫羊藿的1.8倍。结论不同产地淫羊藿中淫羊藿苷的含量存在较大的差异，产地及品种影响淫羊藿药材的质量。

　　【关键词】  淫羊藿 淫羊藿苷 高效液相色谱法

　　Abstract：ObjectiveTo compare the contents of icariin in epimedium from different habital and variety.MethodsEstablish the new HPLC examination method, determine the content of icariin.ResultsThe content is high in Hanzhong of Shanxi province, and the content of icariin which achieves 1.33%, is the highest in North Korea's. the content of icariin is 1.8 times of the same habitat.ConclusionThe contents of icariin from different habitats are significantly different. Habitats and variety Effect the quality of herbs.

　　Key words： Epimedium;  Icariin;  HPLC

　　淫羊藿是小檗科淫羊藿属植物淫羊藿的地上部分,具有“补肾阳,强筋骨,祛风湿”的作用。淫羊藿具有较高的药用和保健价值，我国淫羊藿资源相当丰富，其药用价值和应用领域的拓宽，具有广阔的前景。1995 版《中国药典》收载了5 种淫羊藿植物作为正品淫羊藿药用,分别为心叶淫羊藿、箭叶淫羊藿、巫山淫羊藿、柔毛淫羊藿和朝鲜淫羊藿［1］。

　　淫羊藿苷（Icariin），分子式为C13H40O15，分子量为676。它不仅是淫羊藿的主要成分，也是评价淫羊藿质量的重要指标之一。对于改善心血管系统功能、调节内分泌、增强免疫、抗肿瘤等均表现出生理活性,其次还具有延缓衰老、抗疲劳和耐缺氧等作用［2］。

　　1  器材

　　1.1  仪器与试剂岛津Shimadzu Vp LC10AT高效液相色谱仪,KQ318T超声波清洗器。乙腈为色谱纯（天津四友生物有限公司），甲醇、乙醇、醋酸为分析纯。

　　1.2   原料淫羊藿苷标准品，自制，纯度为98.6%，国家生物类标准样品证书，证书编号GSB1282002。淫羊藿药材，为从陕西、四川、贵州、湖北、湖南、吉林等省的不同区域采集的13个样品，委托浙江大学植物学潘远江教授作品种鉴定。

　　2  方法

　　2.1   色谱条件色谱柱为Shimpack VpODS(150 mm×4.6 mm I.D)；流动相为乙腈、0.2%醋酸水溶液梯度洗脱；流速1.0 ml/min；检测波长270 nm；柱温30 ℃；进样量10 μl。

　　2.2   标准曲线的制备［3］精密称取淫羊藿苷标准品10.00 mg，置入100 ml容量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成0.10 mg/ml的标准品母液。精密量取1，2，3，4，5 ml分别置10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别精密吸取10μl ，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定色谱峰面积。

　　2.3  精密度实验 以淫羊藿苷50%的样品为考察对象，精密吸取样品溶液（0.60 mg/ ml）10 μl，重复进样6次，测定淫羊藿苷的峰面积。

　　2.4  样品的制备［4］药材粉碎，称取500 mg，加70%酒精100 ml，回流浸提30 min，趁热过滤，冷却后定容到100 ml。取浸提液适量，过0.45微米孔径的滤膜，成为液相色谱试样。取试样10μl，重复进样3次，取面积平均值，从线性方程计算含量。

　　3  结果

　　3.1   样品峰的定性［5~7］淫羊藿苷标准品峰保留值19.98 min，药材淫羊藿峰保留值20.17 min。见图1~2。

　　图1  淫羊藿苷标准品（略）

　　图2  湖南淫羊藿（略）

　　3.2  标准曲线以样品浓度为横坐标，色谱峰面积（3次进样平均值）为纵坐标，得线性回归方程： Y=399 441X-14 515，r=0.999 6（单位 mg/ml）。通过精密度实验，结果表明精密度较好，RSD小于1.5%。

　　3.3  样品中淫羊藿苷的含量测定［8~10］ 根据线性方程，测试过的药材与提取物的淫羊藿苷含量见表1。从表1中可见，药材品质、提取物品质，差别都是较大的。

　　表1  药材样品淫羊藿苷含量（略）

　　4  讨论

　　4.1  流动相选择流动相选择时，试验了以下4种方法：A乙腈与0.2%醋酸梯度洗脱，B甲醇与0.2%醋酸水梯度洗脱， C甲醇与乙腈水梯度洗脱，D甲醇与水梯度洗脱。

　　经比较发现，A条件下样品中淫羊藿苷主峰与杂质峰分离度最佳，且与其它条件下色谱图有较大差异。相同试液分别在4种条件下测定，最终提取物中淫羊藿苷的含量出入很大，原因是B，C，D条件下分离效果不好，把朝藿定C并入淫羊藿苷，使结果偏高。

　　4.2  色谱分离效果本法对淫羊藿药材中的各种物质分离良好，除了淫羊藿苷主峰保留值较稳定之外，朝藿定类、金丝桃苷等复现性良好。本法的药材色谱上出现了很多峰，便于对各种成分进行分离、也便于做指纹图鉴别［11］。

　　4.3  与新版《中国药典》中色谱方法的对比《中国药典》规定的方法，主峰与朝藿定不易分离，而且各峰的保留时间很小，非专业色谱工作者很难鉴别。图3是淫羊藿药材按《中国药典》条件检测的，各组分的分离效果明显不良［13］。

　　图3  现行药典方法检测图谱（略）

　　4.4   产地对淫羊藿苷含量的影响安徽、吉林、甘肃、湖南、陕西、四川、重庆等地产的淫羊藿，其含量均有较大的差别，从表3中可以看出，陕西汉中朝鲜淫羊藿中淫羊藿苷含量最高，达到1.33%，分析原因可能是不同的气候、土壤等环境对淫羊藿苷的积累有较大影响。

　　4.5  品种对淫羊藿苷含量的影响 从表3中可以看出，朝鲜淫羊藿中淫羊藿苷含量较高，比同产地的淫羊藿中淫羊藿的含量高，说明了品种对药材的有效成分影响较大。

　　【参考文献】

　　［1］ 郭宝林,肖培根.中药淫羊藿主要种类评述［J］.中国中药杂志, 2003.28（4）：303.

　　［2］ 张璟霞,苏智先,刘守江.淫羊藿研究进展(英文)［J］. 西华师范大学学报(自然科学版), 2003，24（2）：160.

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　　［4］ 朱春林,高素琴.淫羊藿的提取工艺优选［J］.时珍国医国药, 2001，12（8）：687.

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　　［7］ 韩 昱,刘莲英,郭耀武.HPLC法测定益肾灵胶囊中淫羊藿苷的含量［J］.中国药品标准, 2004，5（1）：42.

　　［8］ 李绍平,张 平，夏 泉，等.反相高效液相色谱法测定淫羊藿总黄酮胶囊中淫羊藿苷含量［J］.时珍国医国药, 2003，14（2）：65.

　　［9］ 王明权,毕志明，李 萍，等.高效液相色谱法测定淫羊藿中淫羊藿定C和淫羊藿苷的含量［J］.中国中药杂志, 2003，28（11）：1025.

　　［10］ 郭宝林,王春兰，肖培恩，等.箭叶淫羊藿的黄酮类成分分析和质量评价［J］.中草药, 1996，27（10）：585.

　　［11］ 黄朝瑜,赵陆华，梅玲华,等.淫羊藿药材HpLC指纹图谱的研究［J］.中国天然药物, 2003，01（3）：146.

　　［12］ Harborne J B et al. The Flavonoida-Asvances in Research Since 1986［M］.London:Chapman or Hall,1994.