炒麦芽含药血清中α溴隐停移行成分高效液相色谱法定性定量分析

　　【摘要】 目的对炒麦芽含药血清中α溴隐停进行定性定量分析。方法以炒麦芽中已知含有的成分α溴隐停作为对照品，通过对实验动物家兔灌胃饲服炒麦芽，应用高效液相色谱法分别比较了实验动物家兔炒麦芽含药血清、阳性对照药物溴隐停含药血清及空白不含药血清的高效液相色谱图，建立α溴隐停定量检测的方法学。结果α溴隐停和炒麦芽含药血清及含溴隐停血清成分一部分峰相同，而空白血清在相同保留时间并没有该峰形，HPLC法最终测得炒麦含药血清中α溴隐停含量为(0.070 2±0.01) μg/g。结论 家兔经炒麦芽灌胃后，血中有炒麦芽源性的α溴隐停移行成分，性质并未发生改变，建立了该成分定量分析的方法学操作规范。

　　【关键词】  炒麦芽 高效液相色谱 α 溴隐停

　　Abstract：ObjectiveTo do quantitative and qualitative analysis for the α-Ergolactin in the stir-baked malt contained rabbit blood serum.MethodsTaking αErgolactin as reference, HPLC was used to compare rabbit stir-baked malt contained blood serum,Bromocriptine contained blood serum and blank blood serum.ResultsBoth the stir-baked malt contained blood serum and Bromocriptine contained blood serum had a part of the same peak in the HPLC chromatogram as αErgolactin reconstituent, obviously different with the blank blood serum. ConclusionAfter intragastric administration of rabbit by stir-baked malt,it`s reconstituents can be aborted into blood, it has the same αErgolactin reconstitute as the positive control medicine Bromocriptine.

　　Key words:Stir-baked malt;  HPLC;   αErgolactine;

　　α溴隐停是炒麦芽的成分之一，也是临床用于治疗垂体泌乳素腺瘤的甲磺酸溴隐停成分，因此可能是炒麦芽中对垂体泌乳素腺瘤具有治疗作用的活性成分之一。本实验拟应用高效液相色谱法，对炒麦芽含药血清可能存在的α溴隐停成分进行定性定量分析。

　　1  器材

　　1.1  仪器GilsonGADE型高效液相色谱仪；712数据分析系统 UV/VS118c；紫外检测器Sinochrom ODSBP(5 μm,4.6 mm×250 mm大连伊利特)；802型高速离心机；H66MC型超声震仪。

　　1.2  试剂

　　乙腈，HPLC级，美国迪马（DIKMA）试剂公司；甲醇，HPLC级，美国天地（TEDIA）试剂公司；水，娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）；其余试剂为分析纯。

　　1.3  对照品及样品

　　炒麦芽购于湖北省十堰市人民医院药剂科；α溴隐停,购于中国生物制品药品检定所,批号10753。事先制取家兔〔SCXK（鄂）20052008〕空白血清炒麦芽含药血清及溴隐停含药血清,经剂量换算后，按临床常用量给予灌胃，3次/d给予灌胃，连续7 d，在第7日灌胃后1.5 h，从心脏无菌取血5 ml，1 500 r/min，离心15 min，制取含药血清。

　　2  方法与结果

　　2.1  上样样品的制备α溴隐停对照品制备及样品含药血清、溴隐停含药血清和空白血清血样处理：取α溴隐停2.5 mg到25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度即得。20 μl进样。取血清300 μl置1 ml离心管中10管，加甲醇700 μl，振摇5 min,超声5 min，10 000 r/min离心，取上清液N2挥干，浓缩10倍,100 μl流动相溶解， 20 μl进样。

　　2.2  流动相流动相为乙腈：30 mmol/L醋酸铵溶液＝55∶45；柱温40℃; 流速1.0 ml/min；检测波长300 nm；AUFS＝0.05。在此条件下，炒麦芽含药血清样品的HPLC色谱图中α－溴隐停吸收峰与其他成分的吸收峰达到基线分离，可以进行α－溴隐停移行成分的定性定量分析测定。

　　2.3  炒麦芽含药血清中α溴隐停移行成分的定性分析见图1。

　　α溴隐停和炒麦芽含药血清在90 min附近出峰时间相同，空白血清此时无特征峰，家兔经炒麦芽灌胃后血中有炒麦芽源性α溴隐停成分。

　　2.4  方法学考察及含量测定

　　2.4.1  标准曲线绘制α溴隐停对照品溶液分别手动进样2.5，5，10，15，20 μl，测得α溴隐停的峰面积，以质量Y与色谱峰面积X做标准曲线，得回归方程为：lgY=1.346+2.72lgX (r=0. 971 3)，表明α溴隐停在1.0 ～3.00 μg范围内线性关系良好,结果见表1。表1  标准曲线绘制结果（略）

　　2.4.2  精密度实验取同一浓度的α溴隐停标准品溶液,重复进样5次，5 μl/次，测得α溴隐停峰面积,峰面积平均对数值为3.734, RSD=0.321% (n=5) 表明仪器精密度良好。结果见表2。表2  精密度实验结果（略）

　　2.4.3  稳定性实验取同一炒麦芽含药血清样品供试液,分别于0，2，4，6，8 h进样测定。结果表明α溴隐停色谱峰面积对数的平均值为3.732,RSD=0.331%(n=5)。表明供试炒麦芽含药血清在8 h内基本稳定。见表3。表3  稳定性实验结果（略）

　　2.4.4  重复性实验取同一批供试用家兔炒麦芽含药血清5份，照样品测定方法处理并测定。结果表明，α－溴隐停平均含量为0.04 μg/g，RSD=0.364%(n=5)。表明该方法重复性良好。结果见表4。表4  重复性实验结果（略）

　　2.4.5  加样回收率实验取已知含量供试用炒麦芽含药血清(α溴隐停含量为0.06 ug/g)5份,每份约5 g,精密称定,加入一定量的α溴隐停对照品,按2.1项加以操作,在上述色谱条件下进行分析.结果表明, α溴隐停平均加样回收率为95.67%,RSD=1.05(n=5)。表明该方法可靠。结果见表5。表5  加样回收率实验结果（略）

　　2.4.6  炒麦芽含药血清中α溴隐停含量的测定按炒麦芽含药血清供试样品制备方法制取5批含药血清,每批样进样20 μl,用标准曲线法测定其中的α溴隐停。结果见表6。表6  炒麦芽含药血清中α-溴隐停的含量测定（略）

　　3  讨论

　　中国传统医学中，炒麦芽对乳汁分泌具有调控作用［4］，可用于高泌乳素血症的治疗［1，3，5］。药理学研究发现其中含有α溴隐停成分［6］，由于和临床治疗垂体泌乳素腺瘤药物甲磺酸溴隐停化学结构类似［2］，可能是炒麦芽治疗垂体泌乳素腺瘤的活性成分［3］。为探讨炒麦芽口服后血清中是否有α溴隐停成分存在以及有无变化,给予大耳白兔炒麦芽浸汁灌胃,采血分离含药血清,采用高效液相色谱法，对其进行了定性定量检测，并以临床常用药溴隐停含药血清为对照，为课题后续开展奠定基础。

　　本实验建立了HPLC检测α溴隐停含量测定方法，炒麦芽中α溴隐停成分可被吸收入血且性质未发生变化。测定结果表明炒麦芽含药血清中α溴隐停含量是（0.070 2±0.01）μg/ml，阳性对照药物溴隐停含药血清中的含量是（0.081 3±0.02）μg/ml左右，二者含量相近。以α溴隐停含量而言临床大剂量炒麦芽可能具有类似溴隐停治疗结果。本实验中，炒麦芽含药血清HPLC图谱，α溴隐停特征峰外仍有许多波峰出现，表明炒麦芽含药血清成分多样。炒麦芽入血成分中，不仅α溴隐停成分，其它成分也可能是起作用。

　　由于不同的色谱柱对实验结果具有一定的影响，课题组参考相关文献［7］采用Sinochrom ODS-BP(5μm，4.6 mm×250 mm大连伊利特)色谱柱，出峰较多，峰形较好，故加以选用；在洗脱系统中，分别参考了甲醇-水、乙腈-水及乙腈：30 mmol/L醋酸铵溶液＝55∶45系统，鉴于前两者基线漂移严重，出峰较少，且峰形不好，而乙腈：30 mmol/L醋酸铵溶液＝55∶45系统出峰较多，峰形较佳，且色谱峰分离度好，保留时间适中，分离明显优于甲醇：水、乙腈：水,反复摸索两者比例最终选用；检测波长，选用300 nm，出峰较多，分离度较好；在提取溶剂选择上，分别比较了水、乙醇及甲醇，发现水提物出峰较少，而乙醇提取物基线有漂移现象，最终选用甲醇作为提取溶剂。参照物选择上，由于检测目标是α－溴隐停成分，而在HPLC分析过程中，该成分出峰面积较明显，且保留时间适中而稳定，可以获得标准品，所以仍加以选用。

　　在本次实验过程中，炒麦芽含药血清HPLC色谱图有许多特征峰，说明该法有效，可用于炒麦芽含药血清药物的化学定性定量分析。

　　【参考文献】

　　［1］Peter J. Yeh and Jefferson W. Chen. Pituitary tumors: surgical and medicalmanagement［J］. J. Surgical Oncology.2004,6(2)：67.

　　［2］Watanabe M． Ant/oxidative phenolic compounds from Japanese barnyard millet Echinochloa utilis)grains［J］.Agric Food Chem ，1999，47：4500.

　　［3］杨海燕.中医药治疗高泌乳素血症的研究进展［J］.辽宁中医杂志，2003,30(2):34.

　　［4］胡熙明，张文康，朱庆生，等．中华本草，第8册，第22卷［M］.上海：上海科学技术出版社，1999：7443.

　　［5］邝安坤，丁 霆，陈家伦，等．麦芽对催乳素的影响及在乳溢症治疗上的尝试［J］.中西医结合杂志，1984，4(3)：134.

　　［6］凌俊红，王金辉，王 楠，等.李铣大麦芽的化学成分［J］.沈阳药科大学学报，2005,22( 4)：342.

　　［7］王 楠 ，任玉珍 ，王龙虎 ，王金辉 ，李 铣.HPLC法测定大麦芽中麦黄酮［J］.中草药，2005,36(11)：1632