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【摘要】 目的通过测定不同采收期长白山区野生款冬花芦丁的含量，为确定其采收期提供科学依据。方法采用高效液相色谱法，使用DiamonsilTMC18柱，流动相乙腈-0.4 %磷酸溶液(20∶80)，检测波长255 nm，流速1 ml·min-1，柱温30 ℃。结果长白山区野生款冬芦丁的含量从9月下旬开始上升，到10月下旬达到最高值，11月上旬稍有下降。结论长白山区野生款冬在10月下旬质量最佳。
【关键词】 野生款冬花; 芦丁; 高效液相色谱
款冬花系菊科植物款冬Tussilago farfara L.的干燥花蕾，主要产于陕西的榆林地区，山西、河南、甘肃、青海及四川等多数省区均有分布[1]。本品为常用润肺下气、止咳化痰中药[2]，现代药理学研究还证明其具有抗肿瘤、镇痛抗炎等新的药理活性[3]。分布于长白山区老岭南麓临江界内的野生款冬，发育良好，资源丰富[4]。本文将对不同采收期长白山区野生款冬花芦丁的含量进行报道。
1 材料与仪器
1.1 材料分析检测用野生款冬花于2005、2007年采自长白山区临江界内老岭南麓，经吉林农业大学中药材学院野植教研室鉴定为野生款冬花。样品阴干后粉碎过0.28 mm筛备用。芦丁对照品，批号：0080-9504，购自中国药品生物制品检定所。
1.2 仪器Agilent 1100高效液相色谱仪，二级管阵列检测器(DAD)。色谱柱：DiamonsilTM C18(200 mm×4.6 mm，5 μm)。
2 方法
2.1 样品处理称取款冬花样品2 g，加50 %乙醇80 ml，90 ℃水浴回流提取3 h，过滤，定容至100 ml容量瓶中，过0.45 μm滤膜，得款冬花样品待测液。
2.2 样品中芦丁的含量测定利用Agilent 1100高效液相色谱仪测定不同采收期样品中芦丁的含量，并进行了方法学实验考察。
3 结果
3.1 色谱条件流动相：乙腈-0.4 %磷酸溶液(20∶80);柱温：30 ℃;流速：1.0 mg·ml-1;进样量：20 μl;检测波长：255 nm。
3.2 线性关系考察精密称取120 ℃减压干燥至恒重的芦丁标准品5 mg置25 ml容量瓶中，加甲醇并稀释至刻度，摇匀，即为0.2 mg·ml-1的标准溶液。精密吸取1，2，4，8，16，20 μl的标液，分别注入液相色谱仪，按“3.1”色谱条件测定，以浓度与峰面积求得曲线的回归方程为：Y=639.29X+47.147，r=0.999 4，线性范围0.2～4 μg。
3.3 精密度实验吸取0.2 mg·ml-1的标品溶液20 μl，连续重复进样5次，记录峰面积，结果芦丁的RSD为1.12 %，表明精密度良好。
3.4 稳定性实验供试品溶液于配制后0.5，1，2，4，8，16 h分别进样测定芦丁含量，记录峰面积。结果芦丁峰面积RSD为2.46%，表明样品在16 h内稳定。
3.5 重复性实验称取同一采收期款冬花样品3份，按照样品测定条件下进行操作，测定芦丁的含量，结果RSD为2.55 %。
3.6 加样回收率实验称取已知含量的款冬花样品5份，加入适量的芦丁溶液，按照样品的测定方法测定，计算回收率。结果见表1。表1 加样回收率实验结果
3.7 样品检测吸取款冬花样品待测液20 μl，注入高效液相色谱仪进行检测，色谱图与检测结果见图1及表2。
A-对照品 B-样品
图1 芦丁对照品和款冬样品HPLC图表2 不同采收期长白山区野生款冬中芦丁的含量
4 讨论
提取溶剂的选择：曾采用回流法提取，选择不同提取时间，以不同浓度的乙醇为提取剂，考察了芦丁的提取效果。结果表明，用浓度50 %乙醇提取3 h时芦丁得率最高。
选择流动相时曾用乙腈和水，但峰形不美观，产生拖尾现象，改进工艺后，选用乙腈和0.4 %的磷酸为流动相，有效的解决了此问题。
长白山区野生款冬中芦丁的含量从9月下旬开始上升，到10月下旬达到最高值，11月上旬稍有下降。由此可见长白山区野生款冬10月下旬药材质量较佳，可以进行采收。
本文首次对长白山区野生款冬花芦丁含量进行了研究，为长白山区野生款冬花同其他地区款冬花药材品质的比较提供初步理论依据，但仅以芦丁这一种成分的含量为指标不能具体说明药材质量的差异,长白山野生款冬花中所含的其他化学成分正在进一步研究中。
【参考文献】
[1] LIU Yu-feng, YANG Xiu-wei, WU Bin. GC-MS Analysis of Essential Oil Constituents from Buds of Tussilago farfara L. [J]. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences, 2006, 15(1): 10.
[2] 国家药典委员会. 中国药典[S]. 北京：人民卫生出版社，2005.
[3] 张明发, 沈雅琴. 款冬花的药理毒理研究概况[J]. 中南药学，2005, 3(3)：165.
[4] 胡全德, 杨利民, 王艳梅, 等. 长白山老岭南麓不同海拔高度野生款冬主要性状的遗传参数及性状间相关研究[J]. 吉林农业大学学报， 2005，27(7)：186.