金银花的提取

金银花的提取 一、金银花的化学成分 金银花除含有绿原酸和异绿原酸外，还含有环烯醚萜甙裂环马钱素、獐牙菜甙、马钱素、马钱酸、新环烯醚萜甙；常春藤皂甙配基、齐墩果酸；川续断皂甙乙；黄褐毛忍冬甙甲、α-常春藤皂甙、无患子皂甙B、灰毡毛忍冬皂甙甲、灰毡毛忍冬皂甙乙、灰毡毛忍冬次皂甙甲、灰毡毛忍冬次皂甙乙等。挥发油主要含芳樟醇、双花醇、香叶醇、β-苯乙醇、苯甲醇、异双花醇、α-松油醇、丁香油酚等30多种成分。 　　传统经验及近代药理实验和临床应用都证明，金银花对于多种致病菌有较强的抗菌作用和较好的治疗效果。 二、绿原酸的提取 金银花的主要抗菌有效成分为绿原酸和异绿原酸。它们是奎宁酸和咖啡酸的酯。中药制剂，制备金银花提取物多采用水提、水提醇沉和稀醇提取。也有用水煎后加石灰乳使绿原酸类成分沉淀，然后加稀酸分解得提取物的方法。提取方法 ： 　　1.稀醇提取法 生药用10倍量和8倍量70%乙醇提取2次，每次2h。提取液过滤，减压浓缩，抽干。 　　2.水提法 生药用10倍和8倍量水煎煮2次，每次2h，合并提取液，过滤浓缩至干。 　　3.水提醇沉法 按水提法提取，浓缩至1∶1时，加乙醇至含醇量达75%，静置，过滤，减压浓缩抽干。 　　4.超滤方法 称取干燥金银花一定量，加入10倍量水沸腾煎煮2次，每次1小时，过滤，挤压药渣，合并药液，离心，量上清液体积。取出1克金银花的药液，以测量原液中绿原酸含量。 　　将待超滤溶液倒入储液罐，连接超滤器进行超滤。控制一定的压力，至超滤液的体积占原体积的85%左右时，加入相当于原体积15%的水至储液罐中，继续超滤，至超滤液与原体积相同时，取样(为等体积超滤液)待测含量。往储液罐中加入相当于原来体积25%的水，继续超滤，至超滤液相当于加入的水量时，取样(为1.25倍体积超滤液)待测含量。同法继续超滤，得到1.5倍、2倍和3倍体积的超滤液。 三、主要有效成分含量的测定方法 1.紫外分光光度法 (1)如新鲜植物中含有多元酚氧化酶，则先在100℃加热1小时，或浸在1%亚硫酸氢钠溶液中，然后在石英砂中磨碎，用70%乙醇提取3次(总体积≈10倍样品)，提取液于40℃-50℃减压浓缩至原体积的1/10，再用纸层析分离。吸取此液0.01毫升点在whatman No.1滤纸上，用丁醇-甲醇-水(4∶1∶5)的水相蒸气饱和过夜(20℃)，次日，再用丁醇相下行展开8小时，取出，挥去溶剂后，绿原酸在紫外灯下显暗蓝色荧光，Rf值为0.73，如用氨气熏则变为绿黄色，如喷Hoffners试剂(1%亚硝酸钠的1%甲醇溶液)，斑点则变为黄色，如喷1N氢氧化钠溶液则变为红色。绿原酸的定量则不喷亚硝酸钠溶液及氢氧化钠溶液，可从纸上洗脱，用紫外分光光度计定量。 　　(2)生药0.5克，用70%乙醇在50℃条件提取(5×10毫升)，取提取液0.2毫升点在滤纸上，于暗处用丁醇-醋酸-乙酸丁酯-水(9∶28∶47∶16)层析18小时，在紫外灯下检出绿原酸，用70%乙醇10毫升洗脱，在波长324nm处测吸收度。 　　(3)纸层析法，用正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)在19℃展开26小时而分开，斑点用等量10%醋酸溶液及1%亚硝酸钠溶液喷雾而显色，绿原酸(黄色)的Rf值为0.50。如用氢氧化钠溶液喷雾，绿原酸变为红色。绿原酸的定量是将相应的斑点用异丙醇或甲醇或水洗脱，在波长327nm测量吸收度。 　　(4)取生药于60℃烘至恒重，称取1克，置于瓶中，加95%乙醇25毫升，在80℃水浴上提取1小时。倾出提取液，再加95%乙醇25毫升，重复提取。合并两次提取液，稀释至一定浓度，在波长324nm处测吸收度，用下面公式计算生药中绿原酸的含量。 绿原酸含量%=E×稀释倍数K×样品量(毫克)×100×100% E为吸收度，K为测定常数。用绿原酸纯品测绘标准曲线，按E=KCL的公式(C为标准液浓度，单位为毫克/100毫升，L为比色杯厚度，1厘米)，求得常数K为0.479。用此法分析了从各地药材公司收集的金银花样品中绿原酸的含量。 　　(5)生药粉1克，用70%甲醇提取24小时(室温、暗处)或水浴80℃提取1小时，取部分提取液加于含有2克聚酰胺粉的小柱，用水、稀甲醇溶液洗脱柱子，绿原酸可用0.02%氢氧化钠的70%甲醇溶液洗脱，再用70%甲醇稀释至一定体积，在波长324nm测吸收度，与标准品比较而定量。 　　2.容量法 (1)碘量法 绿原酸易吸附在wofatit L150上，可从混合物中分离，然后用0.1N盐酸溶液或稀硫酸洗脱，用碘量法滴定，如用3N氢氧化钠溶液洗脱则绿原酸被部分地分解成咖啡酸及奎尼酸，但并不影响结果。 　　(2)非水滴定 绿原酸在乙腈-甲酸(3∶1)混合液中可被醋酸铜氧化成相应的邻醌(o-quinone)，此反应可用于植物样品中酚类化全物的氧化滴定。