银翘散为清代医家吴鞠通根据《内经》"风淫于内，治以辛凉，佐以苦甘；热淫于内，治以咸寒，佐以甘苦"的理论而创制的名方，由金银花、连翘、桔梗、薄荷、淡竹叶、甘草、荆芥、淡豆豉、牛蒡子等九味药组成。我们曾对银翘散抗
流感病毒作用进行研究，结果其显示良好的抗流感病毒活性，并从中筛选出抗流感病毒有效部位群（EFY）。在对其化学成分深入、系统的研究基础上，为进一步阐明有效部位群的作用物质基础，同时能有效地控制复方
中药的质量，我们对其
指纹图谱进行研究。
中药作用的特点是多成分的整体性，在其质量控制方面，除单一成分外，有效部位的测定已引起人们的广泛观注。在有效成分不完全明确的前提下，特定中药材或中成药的特征指纹图谱，对于有效地控制中药材或中成药的质量，具有重要的意义。目前指纹图谱已成为国际公认的控制中药或天然药物质量的最有效手段。本文首次对银翘散抗流感病毒有效部位群的特征指纹图谱进行了研究。
采用HPLC建立了EFY的特征指纹图谱。通过对指纹图谱技术参数的统计，包括共有指纹峰的标定、共有指纹峰相对保留时间及峰面积比值的计算、峰形与峰貌的描述、非共有峰面积的确定等，建立了完整的技术参数。在方法学考察中，精密度测定结果显示，单峰面积占总峰面积大于或等于5%的共有指纹峰（2，9，14，17，19号峰），其相对保留时间的RSD为0.50~1.06%；峰面积比值的RSD为3.73~5.19%。重现性测定结果显示，应用同一色谱柱时，相对保留时间的RSD为0.32~0.93%；峰面积比值的RSD为3.54~5.00%。应用不同色谱柱（柱内填料一致）时，相对保留时间的RSD为0.40~3.34%；峰面积比值的RSD为3.22~4.84%。稳定性测定结果显示，相对保留时间的RSD为0.33~0.87%；峰面积比值的RSD为2.63~4.76%。由此表明了测定方法的可靠性。通过对指纹图谱技术参数的统计，可以看出对于不同批次的样品，共有指纹峰在总峰面积中占有95%以上，单峰面积占总峰面积大于或等于5%的共有指纹峰，其相对保留时间的RSD为1.36~5.01%；峰面积比值的RSD为5.31~10.6%。
通过对EFY与组方中各单味药相应部位的相关性研究，即对各单味药阳性及阴性样品的测定，归属了指纹图谱中主要指纹峰的来源，9味药中以牛蒡子、甘草、金银花贡献较大。采用HPLC/MS/MS鉴定及对照品加样HPLC测定法，确认了其中主要的指纹峰，2号峰（绿原酸，金银花），9号峰（甘草苷，甘草），10号峰（甘草素-4’-O-β-D-芹糖（1→2）-β-D-葡萄糖苷，甘草），11号峰（甘草），12号峰（连翘酯苷，连翘），13号峰（芦丁，连翘），14号峰（4，5-二咖啡酰基奎宁酸，金银花），15号峰（3，5-二咖啡酰基奎宁酸，金银花），16号峰（异甘草素-4-O-β-D-芹糖（1→2）-β-D-葡萄糖苷），17号峰（3，4-二咖啡酰基奎宁酸，金银花），18号峰（异甘草素-2’-β-D-芹糖（1→2）-β-D-葡萄糖苷，甘草），19号峰（牛蒡子苷，牛蒡子），21号峰（醉鱼草苷，薄荷），25号峰（染料木素），28号峰（异甘草素，甘草）。
上述研究表明，特征指纹图谱的建立，可以有效控制银翘散抗流感病毒有效部位群的质量，同时也提示银翘散抗流感病毒作用的物质基础可能就是牛蒡子、甘草和金银花中的某些化学成分。
作者：
2006-3-27