不同产地丹参水溶性成分和脂溶性成分指纹图谱测定及相关性研究中药指纹图谱 | 39康复网

   摘要:目的分析不同产地丹参水溶性成分和脂溶性成分指纹图谱的变化情况，研究丹参脂溶性成分含量与水溶性成分含量之间的相关性。方法采用HPLC法测定不同产地丹参水溶性成分、脂溶性成分的指纹图谱以及主要成分的含量，运用SPSS统计软件分析丹参成分变化情况。结果丹参脂溶性成分和水溶性成分指纹图谱随产地不同而变化，丹参脂溶性成分含量与水溶性成分含量高低无内在关系。结论建议制订丹参丹酚酸类成分含量，作为适用于丹参类注射液用的丹参药材标准，以区别于供复方丹参片等制剂用的丹参。

    关健词:丹参;丹参类注射液;丹酚酸B; 丹参酮IIA

    丹参 Salviam iltiorrhizaB ge.收载于《中华人民共和国药典》2000年版一部，主要含脂溶性二菇醒类和水溶性酚酸类等成分，《中华人民共和国药典》2000年版一部丹参项下只测定丹参酮IIA来控制丹参的质量，对于丹参类注射液制剂如:丹参注射液、香丹注射液、冠心宁注射液等均采用水提、醇沉的工艺，主要提取丹参中水溶性酚酸类成分，如丹参素、原儿茶醛、丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、紫草
酸、丹酚酸D和丹酚酸E等，也是丹参类注射液中的主要一类有效成分。而原药材丹参只控制脂溶性丹参酮IIA的含量，水溶性酚酸类成分的质量如何?二者是否有内在联系?如何控制原药材质量?本实验希望通过测定不同产地来源的丹参中脂溶性成分和水溶性成分的指纹图谱，研究两者之间的相关性，为解决上述问题提供依据。
    1 仪器与试药
    HP 1100 系列高效液相色谱仪:包括G1322A脱气机，G1311A四元泵,G1313A 自动进样仪，G1316-AVWD监测器，AgilentC hemstaion( A.0 9.03)
    甲醇为分析纯和色谱纯，水为重蒸水，冰醋酸为分析纯;二氢丹参酮I、丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮IIA、丹参素钠、原儿茶醛和丹酚酸B对照品均购于中国药品生物制品检定所。不同来源的丹参药材共33批。经浙江省药品检验所中药室郭增喜中药师鉴定。
    2 方法
    2. 1 色谱条件
    2.1.1 丹参脂溶性成分指纹图谱测定色谱条件:色谱柱:Shim-pack VP-ODS (150 mm X 4.6 mm, 5μm);流动相:甲醇(A)-水(B)，程序梯度洗脱:64%A (30min)→65%A(15min) →85%A(15min);检测波长:270 nm;体积流量:1.0 mL/min;柱温:25℃。
    2.1.2 丹参水溶性成分指纹图谱测定色谱条件:色谱柱:Shim-pack VP-ODS (150 mm X 4.6 mm, 5μm) ;流动相为甲醇(A)-0.5% 冰醋酸(B)水溶液，程序梯度洗脱:10%(A) (0～6min) →60% (A)(20min)100% ;检测波长:280nm;体积流量:1. 0 mL/min;柱温:25℃。
    2.2 溶液制备
    2.2.1 丹参脂溶性成分供试品溶液制备:精密称取本品粉末0. 2 g(过三号筛)，加乙醚30 mL，加热回流提取30 min,滤过，用适量乙醚洗涤，合并滤液及洗液，挥至近干，取出，残留物用甲醇适量溶解，置于25 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，10 000 r/min离心10 min，取上清液作为供试品溶液。
    2.2. 2 丹参水溶性成分供试品溶液制备:称取本品粉末0. 5 g(过三号筛)，包于滤纸中，置于150 mL的玻璃烧瓶中，加水50 mL，在95℃ 水浴上提取4h，取出，放冷，10 000 r/min离心10 min，取上清液作为供试品溶液。
    3 实验结果
    3.1 脂溶性成分和水溶性成分指纹图谱中主要成分的含量测定:结果见表1(相同产地来源的丹参，各成分含量以平均含量+标准偏差计算)。
    3.2 月参脂溶性成分和水溶性成分指纹图谱:见图1。
    3.3 丹参脂溶性成分和水溶性成分之间内在的相关性研究:以丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B含量之和为纵坐标，以二氢丹参酮I、丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮IIA含量之和为横坐标，作散点图。由于丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B3个峰的总峰面积占水溶性成分指纹图谱总峰面积的60% 以上，二氢丹参酮I、丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮IIA 4个峰的总峰面积占脂溶性成分指纹图谱总峰面积的70% 以上。因此认为丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B含量之和能够体现水溶性成分中丹酚酸类成分含量;二氢丹参酮I、丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮IIA 4个峰的含量之和能够体现脂溶性成分中的二枯醒类成分含量。从图2可知，水溶性成分含量并没有随脂溶性成__分含量升高而升高或降低，而是呈独立的两个体系。
3.4 丹参中脂溶性成分和水溶性成分含量与产地关系分析:由于脂溶性成分和水溶性成分之间无明显的内在关系，因此分别研究脂溶性和水溶性成分含量与样品产地之间的关系，采用SPSS统计软件进行聚类分析，其中水溶性成分以丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B和三者含量之和为变量，脂溶性成分以二氢丹参酮I、丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮IIA含量及其含量之和为变量，结果见图3.
    若临界组间距离控制在5，根据脂溶性成分含量，可把样品分成4组，第I组包括:3,7,5,10,2,20,22,11,24,12,13,9,4,8,21,6,26 ,4个脂溶性成分质量分数之和为0.07%～0.35%，丹参酮I, 质量分数在0.04%～0.23%;第2组包括:1,18,31,
32, 19, 15, 25, 4个脂溶性成分质量分数之和为0.56%～-0.74%，丹参酮IIA质量分数在0.22%～0.28%;第3组包括:16,30,14,4个脂溶性成分质量分数之和0.88%～0.95%，丹参酮I, 质量分数在0.35%～0.40%;第4组为17,4个脂溶性成分质量分数之和大于1.0%，丹参酮I, 大于0.40%可见丹参酮IIA质量分数与丹参中脂溶性成分成正比，从这一点看，药典规定丹参酮亚A含量既控制了脂溶性成分含量。
    若临界组间距离控制在5，根据水溶性成分含量，可把样品分成3组，第1组包括:5,7,8,21,25,19,15,16,17,14,18,11,3个水溶性成分质量分数之和为1.64%～3.69%，丹酚酸B质量分数为1.28%～3.13%;第2组包括:30,32,10,9,22,1,23,13,24,4,29,20,12,31,2,3,3个水溶性成分质量分数之和为4. 12%～6. 1700，丹酚酸B 为3. 65%一5.3900;第3组包括:6,3个水溶性成分质量分数之和大于8.0%，丹酚酸B质量分数大于7.000。可见丹酚酸B含量基本可以判定不同丹参中溶性成分含量。
    4 讨论
    4. 1 实验中水溶性成分和脂溶性成分指纹图谱按国家有关规定进行了方法学研究，并符合要求。
    4.2 从对33个不同产地的丹参脂溶性成分和水溶性成分含量测定结果与相关性分析可知脂溶性成分和水溶性成分含量随产地不同而有明显差异，但水溶性成分含量并没有随脂溶性成分含量升高而升高或降低，而是呈独立的两个体系，即无内在关系。
    4.3 经SPSS统计软件的聚类分析结果可知丹参酮IA含量与丹参中脂溶性成分含量成正比，即丹参酮IA可作为脂溶性成分的质控指标成分;丹酚酸B含量与丹参中水溶性成分含量成正比，即丹酚酸B可作为水溶性成分的质控指标成分。
    4.4 从表1可知四川、浙江、河北种植的丹参，丹参酮IA含量较低，达不到药典要求，但水溶性酚酸类成分含量较高，并高于丹参酮IA含量较高的丹参，建议可作为丹参水溶性成分制剂的原料，以扩大药用资源，另丹参类注射剂可制定适合自身使用的药材标准，即制订丹酚酸B含量以控制药材质量。

作者： 2006-3-27