黄连与吴茱英分煎后配伍时主要组分含量变化规律研究中药指纹图谱 | 39康复网

摘要:目的考察黄连与吴茱艾分煎后二药配伍时主要组分的含量变化规律。方法黄连和吴茱英药材用水分别煎煮，分煎液按不同比例配伍，在100℃下加热1h。在优化的RP-HPLC条件下进行分析，比较色谱指纹图谱，考察主要组分相对峰面积变化和配伍比例之间的关系。结果黄连水煎液和吴茱芡水煎液配伍后色谱峰具有加和性，未见新峰产生。吴茱芡中主要组分的相对峰面积未见明显变化，黄连生物碱的相对峰面积随吴茱芙水煎液配比的增加呈线性下降。结论吴茱芡组分存在时可使黄连生物碱的溶解度下降。
关键词:黄连;吴茱芙;药对;分煎;配伍

    黄连一吴茱英药对已有悠久的应用历史，古方中的左金丸(6:1)、变通丸(又叫茱英丸，I:I) 、甘露散(2:1)等，都是通过改变该药对配伍比例而来。现代临床应用也证明，调整黄连、吴茱英的用量比例，可用于治疗多种与脾胃功能失调有关的疾病，如胃院痛、腹痛、呕吐、呢逆、泄泻、便秘、痢疾、反酸暖气、痞满等川。近年来，对黄连一吴茱英药对的物质基础进行了较多的研究，得出了黄连与吴茱英配伍后可使黄连中生物碱溶出率降低的结论，其中文献[2-3]进一步证实了黄连与吴茱英配伍后各种黄连生物碱的溶出率与黄连用量成相同比例下降。另外，徐艳春等困的研究表明黄连一吴茱英药对配伍后吴茱英碱和吴茱英次碱的溶出率均有不同程度的下降。到目前为止，采用的研究方法都是黄连与吴茱英药材共煎后通过HPLC或紫外分光光度法来分析黄连生物碱或吴茱英生物碱溶出率的变化。由于药材在共煎过程中影响因素众多，如黄连组分和吴茱英组分之间的相互作用对溶解度的影响、药渣对组分的吸附作用、可能发生的化学反应等，因此对吴茱英存在时黄连生物碱溶出率降低的真正原因尚未能给出一个合理的解释。
    为了消除药材共煎过程中黄连组分和吴茱英组分之间的相互作用对溶解度的影响以及药渣对组分的吸附作用，本实验设计了黄连和吴茱英药材先分煎，然后再用分煎液配伍的思路，来研究配伍后主要组分的含量变化规律，以期为中药配伍理论提供现代科学依据。
1 材料与仪器
    黄连为毛莫科植物味连(Coptisch inensisF ranch)的干燥根，吴茱英为芸香科植物吴茱英的干燥近成熟果实，均由中国中医研究院中药研究所何希荣主管中药师提供并鉴定。盐酸小聚碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱和吴茱英次碱4种对照品(中国药品生物制品检定所);黄连碱由本实验室自制，纯度大于98%。乙睛(色谱纯)，十二烷基硫酸钠(进口分装，广州市医药公司化学试剂玻璃仪器批发部)，磷酸(分析纯)，水为超纯水。Agilent1100型高效液相色谱仪，配四元梯度泵、在线脱气机、自动进样器、柱温箱、W 检测器等。
2 实验方法
2.1 色谱条件
    色谱柱 : DiamonsilC ,:柱(4.6mmx 2 50m m,5uM，迪马公司);流动相:A相为场0-SDS-珑104(10 00m L:5g :lm L),B 相为CH3CN -H20-SDS-H3P0 4(600rn L:400tn L:5g :l m L);采用线形梯度洗脱程序:0m in,10 %B ;35 m in,23 % B;37 min,35 %B ;45rnin,35% B;47 min,80 % B;8 0 min,80 % B;100 min, 100%B;流速:0.8m L/min;柱温40`C;检测波长325nm.
2.2 供试品溶液制备
    黄连、吴茱英药材各200g ，分别加水120 0mL,回流提取1.5 h，过滤，药渣加水800 mL，回流提取1h，过滤，两次滤液合并，过滤并定容成2 000 mL。黄连水煎液和吴茱英水煎液按表1所示体积比混合后于100℃油浴中加热1h，冷却后补充损失的水分，即为供试品溶液。HPLC分析前用0.45um微孔滤膜过滤。
2.3 测定方法
    每次试验取供试品溶液10u L进样，按前述色谱条件进行分析，记录色谱图，计算各色谱峰面积。
2.4 方法学验证
    以黄连水煎液和吴茱英水煎液2:8配伍样本为测定对象，对仪器精密度、实验方法稳定性和重复性作了考察。
2.4.1 精密度实验
    取同一份供试品溶液，连续进样5次，各色谱峰保留时间RSD< 0.9%，各色谱峰峰面积RSD<0.8%.
2.4.2 稳定性实验
    取同一份供试品溶液，分别在0,2,5,10,24 h等时间进行分析，各色谱峰保留时间的RSD=1.1%，各色谱峰峰面积RSD=1.8%。
2.4.3 重复性实验
    取黄连水煎液和吴茱英水煎液2:8配伍样本5份，分别按上法加热、分析，各色谱峰保留时间RSD=0.9%，各色谱峰峰面积RSD2.3%。
3 实验结果
    典型样品的色谱指纹图谱，见图1(略)。比较A,B ,C色谱图可见，黄连水煎液与吴茱英水煎液配伍后色谱峰具有加和性，且未见新峰产生。吴茱英中主要组分相对峰面积与配伍比例间的变化关系见表2，其中相对峰面积为各样本中所含吴茱英的生药量换算到相等后，各配伍样品加热后的峰面积除以吴茱英水煎液加热后所对应的峰面积。1一7组分的相对峰面积和配伍比例之间的关系见图2(略)。从表2和图2可以看出，吴茱英中1一7组分的相对峰面积和配伍样品中黄连水煎液所占的比例没有明显的相关性，1一7号峰的相对峰面积变化不大，受配伍比例的影响较小，也即黄连水煎液和吴茱英水煎液配伍后，吴茱英中包括吴茱英次碱在内的这7种组分的含量未见明显变化。另外，由于吴茱英中组分的峰面积较小，所以相对峰面积波动稍大。
    黄连中主要组分相对峰面积与配伍比例间的变化关系见表3，其中相对峰面积为各样本中所含黄连的生药量换算到相等后，各配伍样品加热后的峰面积除以黄连水煎液加热后所对应的峰面积。8-12组分的相对峰面积和配伍比例之间的关系见图3(略)。从表3和图3可以看出，黄连中8一12号组分的相对峰面积随吴茱英水煎液配比的增加呈线性下降。同时，在实验中发现黄连水煎液和吴茱英水煎液配伍后样品会产生少量沉淀，生成的沉淀经过滤后用乙醇溶解，再经HPLC分析发现其成分主要是黄连生物碱类物质，与母液的HPLC指纹图谱比较，未见新峰产生。由此推断配伍样品8一12号组分相对峰面积下降的原因是配伍后黄连生物碱由于溶解度下降产生沉淀引起。
4 讨论
4.1 在分析方法上对流动相的组成及洗脱方式分别进行了考察优化，优化后的高效液相色谱分析方法能使各色谱峰得到良好分离。甲醇一水一磷酸一SDS体系可使大多数色谱峰峰形良好;等度洗脱测定时分离效果较差，如以梯度洗脱则可使大部分色谱峰得到良好分离。另外，每次运行后柱平衡时间至少需要20 min，才能确保下次分析时色谱峰的峰形和分离度。
4.2 提出了一个研究中药配伍的新思路，即先对单味药材进行煎煮，然后对单煎液进行配伍研究。这一思路可以消除药材共煎过程中黄连组分和吴茱英组分之间的相互作用对溶解度的影响以及药渣对组分的吸附作用，对研究中药物质基础、搞清中药配伍规律具有重要的意义。
4.3 对黄连水煎液和吴茱英水煎液配伍时主要组分含量变化规律进行了研究，结果表明，黄连水煎液和吴茱英水煎液配伍后色谱峰具有加和性，吴茱英中主要组分含量未见明显变化，黄连生物碱的含量下降，下降最多可达15.1%，推测其原因可能是吴茱英中的组分存在时可引起黄连生物碱的溶解度降低。
4.4 本实验采用相对峰面积方式对黄连水煎液和吴茱英水煎液配伍时主要组分含量变化规律研究所得到的结果仅是组分含量的相对变化情况。根据研究结果，在生产含黄连和吴茱英的中成药时，在工艺设计中应考虑煎煮方式对黄连生物碱溶出率的影

作者： 2006-3-27