甘肃道地药材大黄不同部位的指纹图谱研究中药指纹图谱 | 39康复网

   摘要:目的:考察甘肃道地药材大黄不同部位(根头、根身和根尾) 有效成分的差异性,为其质量控制提供理论依据。方法:采用高效液相色谱法对大黄不同部位提取物的指纹图谱进行比较研究,其中色谱柱为C18 ,流动相为甲醇- 0.1 %磷酸水溶液(70∶30) ,流速为1.0ml / min ,柱温为室温,检测波长为280nm。结果:大黄不同部位的高效液相色谱指纹图谱具有明显的区别,有效成分大黄素、大黄酚等含量差别很大,含量自根头、根身和根尾部位逐渐递减。结论:为更好地保证大黄药材的药用价值和质量,应区别不同部位对其进行质量控制。
    关键词:道地药材;大黄;不同部位;高效液相色谱;指纹图谱

    大黄系蓼科植物药用大黄(Radixet Rhizoma Rhei) 的干燥根及根茎, 为甘肃省的道地野生药材。大黄整体根茎均有药用价值, 为保证其药效以及产品质量稳定性[1 ] , 已有文献报道[2 ]运用色谱指纹技术对甘肃道地药材大黄进行了鉴定研究。笔者则主要通过对大黄不同部位(根头、根身和根尾) 的指纹图谱进行比较研究, 以考察其不同部位有效成分含量的差异性, 为控制甘肃道地药材大黄的质量提供理论依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
    LC - 6A 高效液相色谱仪, 包括SPD - 6A 紫外可变波长检测器(日本岛津公司) ; Anastar 色谱工作站(天津Autoscience 公司) ;AS5150 超声清洗器(天津奥特赛恩斯公司) 。
1.2 试药
    大黄对照药材、大黄素、大黄酚(中国药品生物制品检定所) ;道地药材大黄(编号:1、2、3、4) 产于甘肃省武都地区,9 月～10 月采集, 挖出根部, 除去颈叶, 分成不同部位切片, 干燥; 甲醇为色谱纯,冰醋酸为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
    色谱柱: C18 (150mm ×4.6mm , 5μm) 、C18 保护柱; 流动相: 甲醇- 0.1 %磷酸溶液(70∶30) ; 流速: 1.0ml / min ; 柱温:室温;检测波长:280nm。
2.2 药材不同部位的划分
    采集大黄药材,分别将其根茎横切,根据横切面的大小将横切面最大的定为根头,横切面较小的定为根身,根须定为根尾。
2.3 大黄药材指纹图谱的建立
2.3.1 对照品溶液的制备: 分别准确称取大黄素、大黄酚对照品适量,各置于不同容量瓶中,以甲醇为溶剂,分别配制成含大黄素、大黄酚各为1mg/ ml 的对照品溶液。同理,配制成含大黄素、大黄酚各为1mg/ ml 的混合对照品溶液。
2.3.2 供试药材溶液的制备: 准确称取道地大黄药材100mg , 研碎, 置于50ml 烧瓶中, 加甲醇25ml , 称量, 加热回流30min , 冷却,称量,补甲醇至足量。过滤,取滤液5ml 至50ml干燥烧瓶中,蒸干后加215mol / ml 硫酸10ml ,加热回流1h ,冷却,移入分液漏斗中,加入氯仿,每次约8ml ,洗涤2 次,合并分离液,用无水硫酸钠脱水,倒出氯仿液,洗涤3 次,每次约4ml ,合并氯仿液,蒸干,加甲醇10ml ,称量,水浴中微热溶解,取出,补甲醇至足量。样品经微孔滤膜过滤,按“2.1”项下色谱条件进样分析。
2.3.3 共有峰的确定: 通过对4 批大黄药材不同部位(根头、根身和根尾) 的指纹图谱进行分析,其中以大黄素(峰10) 为参照物,超过总峰面积83 %的指纹峰有峰1 、2 、5 、7 、8 、9 、10 、11 。4批大黄药材不同部位共有峰相对保留时间、峰面积及相对峰面积统计结果详见表1 、表2 ;对照药材与道地药材指纹图谱比较详见表3 。
2.3.4 重现性试验:取大黄药材(编号: 2) ,按“2.3.2”项下方法制备成供试品溶液, 再按指纹图谱重现性规定方法, 分别对共有峰的相对保留时间进行统计,结果RSD ≤3 %(n = 5) 。
2.3.5 精密度试验:取大黄药材(编号: 2) ,按“2.3.2”项下方法制备成供试品溶液, 再按照指纹图谱精密度规定方法, 连续进样5 次, 分别对共有峰的相对保留时间及相对峰面积进行统计,结果RSD ≤3 %。
2.3.6 稳定性试验:取大黄药材(编号: 2) ,按“2.3.2”项下方法制备成供试品溶液, 再按指纹图谱稳定性规定方法, 考查溶液放置24h 内的稳定性,分别对共有峰的相对保留时间及相对峰面积进行统计, 结果RSD ≤3 % , 表明供试品溶液在24h 内稳定。
2.3.7 不同部位(根头、根身和根尾) 大黄药材图谱的建立:取不同部位大黄药材,按“2.3.2”项下方法制备成供试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件进样(采样时间初次为120min ,测定2次后, 第3 次时采样时间为45min) 测定3 批大黄对照药材和大黄道地药材根头、根身和根尾的指纹图谱,色谱详见图1 。
3 讨论
    大黄药材不同部位(根头、根身和根尾) 的指纹图谱表明,不同部位所含的大黄素、大黄酚及其它有效成分含量差别很大,含量自根头、根身和根尾部位逐渐递减。因此,在制订药材或制剂质量标准时应对所选用大黄药材的部位进行明确说明。
    笔者参考了相关文献[3 ] , 并对比了标准大黄药材在254 、280nm 波长处的紫外光谱,结果发现在280nm 波长处时,大黄素和大黄酚能得到很好的基线分离, 且得到的色谱峰较多, 反应的信息较完全,故采用280nm 为测定波长。
    同一产地大黄药材,其不同部位的指纹图谱也有很大的区别,其相对峰面积有较大差异,不能相互替代,故在进行定量测定时, 应建立统一的定量标准, 选择大黄药材的具体部位作为制剂药材, 对药材种植实施《中药材生产质量管理规范》( GAP) 管理,严格采收加工等环节,使药品的质量可控,指纹图谱相对稳定。
    笔者建立的测定方法稳定、可靠、简便、快速,分离度高且重现性较好,可为《中国药典》建立原药材的质量标准提供依据。

作者： 2006-3-27