摘要：目的：用高效液相色谱法测定参麦注射液中人参皂苷Rg1和Rb1的含量，并用所检测到的
指纹图谱考察参麦注射液不同批次产品内在质量的一致性。方法采用汉邦C18（5um，250mm×4.6mm）色谱柱，流动相A为50mmol/mlKH2PO4溶液，B为乙腈-水（80:20），pH梯度洗脱，流速1ml/min，检测波长为202nm，柱温为40℃。结果人参皂苷Rg1和Rb1的加样回收率>99%，RSD<1.2%，人参皂苷Rg1和Rb1分别在4.20～42.0和3.30～33.0范围内线性关系良好，色谱指纹图谱中分离出30多个峰。结论将指标性成分人参皂苷Rg1和Rb1的含量测定与色谱指纹图谱比较分析相结合，可提高参麦注射液的内在质量控制水平。
关键词：参麦注射液；人参皂苷；色谱指纹图谱；质量控制；批次间一致性
1 实验仪器、试剂和样品
Shimadzu高效液相色谱仪，包括LC-10AT高压泵，SPD-M10A二极管阵列检测器，SIL-10AD自动进样器，CTO-10AS恒温箱，DGU-14A在线脱气机，Shimadzu Class-VP色谱数据工作站。重蒸馏水，色谱纯乙腈、甲醇，其余试剂为分析纯。人参皂苷E Rg1和Rb1对照品（中国药品生物制品检定所），参麦注射液样品（市售）。
2方法与结果
2.1 色谱分析条件
色谱柱：汉邦C18（5um，250mm×4.6mm），淮阴汉邦科技有限公司），流速1ml/min，检测波长为202nm，柱温为40℃，采用二元梯度洗脱，流动相A为50mmol/mlKH2PO4溶液，B为乙腈-水（80:20），梯度洗脱程序如下：0～5min，B的体积百分比为25%；5～45min，B的体积百分比增加至68.6；45～50min，B的体积百分比为68.6%；50～65min，B的体积百分比增加至85%。
2.2 线性关系考察
取人参皂苷Rg1 4.2mg，用流动相定容至10ml，得对照品溶液I。精密称取人参皂苷Rb13.3mg，用流动相定容至10ml，得对照品溶液II。准确进样10，20，50，100ul对照品溶液I和II，按上述色谱条件测定峰面积，以平均峰面积的积分值为纵坐标，对照品进样量为横坐标，进行线性回归，得回归方程，如下式：
Rg1：A=2.77×100000m+1.96×10000,r=0.9998
Rb1：A=1.85×100000m+2.52×10000,r=1.0000
结果表明，人参皂苷Rg1和Rb1的线性范围分别为4.20～42.0ug和3.30～33.0ug。
2.3精密度实验
取上述对照品溶液100ul测各次峰面积，人参皂苷Rg1和Rb1峰面积的RSD分别为0.56%和0.58%，n=5。
2.4 重复性实验
取参麦注射液供试品，测各次峰面积，人参皂苷Rg1和Rb1峰面积的RSD分别为0.78%和0.69%，n=5。
2.5 加样回收实验
取10ml量瓶，精密加入对照品溶液Ⅰ和对照品溶液Ⅱ以及待测样品2ml，加流动相稀释至刻度，摇匀作为供试品A。精密取样品2ml，置10ml量瓶中，加入流动相A稀释至刻度，摇匀作为供试品B。分别取上述2种溶液进样100ul，进行色谱分析。用供试品溶液P的峰面积减去供试品溶液B的相应峰面积，测得人参皂苷Rg1和Rb1平均回收率分别为99.5%，99.2%，RSD分别为1.12%，0.96%，n=5。
2.6 样品测定与色谱指纹图谱获取
取缺人参的参麦注射液阴性对照品，经滤膜过滤后直接进样100ul，结果见图1，在人参皂苷Rg1和Rb1的保留时间处未出现明显干扰峰。A厂2个批号的指纹图谱见图2，其它厂家样品指纹图谱见图3。取各厂的参麦注射液样品，经滤膜过滤后直接进样100ul，人参皂苷Rg1和Rb1的含量测定结果见表1。
3 讨论
3.1对C18,C8以及NH2基三种类型色谱柱进行考察比较，结果发现C18柱更适合分析参麦注射液，所得峰数、峰分离度均优于其它两类色谱柱。又比较了淮阴产汉邦C18柱、大连产依利特C18柱、Agilent公司产Zorbax Extehd- C18柱等，结果以淮阴产汉邦C18柱最佳。
3.2 实验中曾观察到柱温的变化会影响不同谱图中同一谱峰的保留时间，为获得重现性较好的色谱指纹图谱，应保持柱温恒定。比较了20℃和40℃柱温两种操作条件，发现后者柱压较低，出峰较快，峰分离度较好，故选用40℃的柱温。
3.3 曾选用乙腈-水体系，但谱峰拖尾严重，后在流动相中加入50mmol/L的KH2PO4缓冲盐后峰拖尾现象有明显改善。
3.4 由表#知，同厂家不同批次间参麦注射液的人参皂苷Rg1和Rb1含量差异较小，而不同生产厂家参麦注射液中人参皂苷Rg1和Rb1含量差异较大，D厂产品的人参皂苷含量明显偏高。在相同厂家不同批次产品间，人参皂苷Rg1含量的波动比Rb1的更大。尽管含量测定法可准确反映少数几个指标性成分的变化，却很难反映产品总体化学组成的波动。
3.5 由
中药指纹图谱的比较分析可获知中药化学组成的总体波动情况。在本文所做的参麦注射液样品的指纹图谱中有30多个峰，通过不同指纹图谱间对应皂苷谱峰的比较，可更全面地分析不同批次产品整体化学组成的波动。由图2可知，A厂两个批次的指纹图谱较为相似，表明这两批次产品质量稳定性较好。由图3可知，不同产家参麦注射液指纹图谱所含谱峰数较为接近，但谱图中谱峰间的大小比例关系却存在较大差异。其中D厂的指纹图谱中20～35min.段皂苷峰明显偏高，而35min后区域内的皂苷指纹峰偏低。目前部颁标准是以人参皂苷总量作为检测标准，且只规定下限，仅据此标准很难反映上述所观察到的差异。
3.6仅根据指标性成分的含量测定很难获知中药化学成分总体组成的波动，而只利用指纹图谱比较分析也不能使某些相对明确的活性成分得到更为直接而有效的控制，因此在中药物质基础不明确的情况下，将指标性成分测定与指纹图谱的比较分析相结合是控制中药产品质量的一种可行方法。本实验采用高效液相色谱法，进行一次色谱分析就能测定参麦注射液的人参皂苷Rg1和Rb1含量，同时得到参麦注射液的色谱指纹图谱，可用于分析不同批次产品的一致性。将指标性成分测定和指纹图谱比较分析相结合，无需增加过多测试成本，可提高参麦注射液内在质量的控制水平。
参考文献略
作者:陈闽军，吴永江，程翼宇
来源:中国
药学杂志
作者：
2006-4-1