对实施中药注射剂指纹图谱检测标准的思考与对策

【机　构】 北京市药品检验所，北京100035 中国中医研究院中药研究所
【刊　名】中国中医药信息杂志.2001,8(6).-37-39 

    国家药品监督管理局(SDA)的国药管注[20001157号文件“关于加强中药注册管理有关事宜的通知”和国药管注[2000]348号文件“关于印发《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》的通知”，对已批准的中药注射剂和申报的新中药注射剂实行药材和制剂的指纹图谱标推，并于2000年8月16日发布了《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》。随后国家药品监督管理局又举办了实施中药注射剂指纹图谱标准管理及技术要求工作研讨会，对指纹图谱标准的具体管理要求、技术规范以及研究方法均进行了详细说明和培训。明确要求对新申报的中药注射剂和已上市的中药注射剂均实行指纹图谱标推，并停止审批仿制中药注射剂，要求在2004年年底之前完成已上市中药注射剂的指纹图谱标准工作，否则将撤销其批准文号。因此，作为中药注射剂的研究和生产单位应采取什么对策落实，已迫在眉睫。基于此，我们根据多年从事中药新药研究和申报的经验提出一些思考和建议，供大家参。
    1  实行指纹图谱标准的重要性和必然性
1．1  国外对植物药的指纹图谱标准要求现状
    美国FDA将植物制品(Botanical Product，Botanical)分为三部分：食物(Food)、食物补充品(Dietary supplement)和植物药(Botanical drug product)c1994年lO月25日美国国会正式通过了食物补充品法令和1996年8月16日FDA制定的《FDA有关植物制品的指南(试行)》，对植物食物补充品和植物药进行了规范和法制化。其中在对植物药品的临床研究申请(Investigational New Drug，IND)中的化学、生产和控制(Chemical，Manufacture，Control，CMC)部分对植物原料(Botanical Raw Meterial)、植物药中间品(Botanical
 Drug Substance)和植物药产品(Botanical Drug Product)均要求提供指纹图谱(Fingerprint)，尤其是色谱指纹图谱(Chromatographic Fingerprint). 法国、德国等欧洲国家的科学家亦制订了许多植物药的指纹图谱，说明欧美对植物药的研究和法规要求在某些方面已经走到了我们的前面。从国际上天然药物的发展趋势上看，为了实现中药现代化，提高中药的质量，增加我国生产的中药在世界天然药物市场上的占有率，对中药实行指纹图谱标冶是必然的。
1，2  国内对中药实行指纹图语标准的必要性
    作为任何一个药物，都应该具有有效性(Effective)、安全性(Safety)、可控性(Controlling)、一致性(Uniformity)和稳定性(stability)，缺一不可.以前我国仅重视有效性，近10多年来对安全性已有了较高要求。GLP标推要求规范动物试验，通过提高质量标准使可控性有所提高，药品稳定性也得到了应有重视，但对批一致性却重视不够.所谓批—致系指批与批之间质量应该一致，差异很小，才能保证每批药品具有相同的效果.要做到批与批一致，对中药来说非常团难。因中药从药材产地开始即存在来源、品种、采收季节、
加工方法等差异的影响，提取和成型时又有很多影响因素需要控制，尽管现在SDA要求药材的种植、加工实行GAP，生产实行GMP，但由于质量标推要求较低，仍无法做到批一致性，
影响药品质量。造成上述问题的原因是现行标准含量测定—般仅测某一味主要药物的一个主要成分，而薄层鉴别又仅仅是定性，无法全面反映药品内在质量的好坏.而指纹图谱既具有定性的作用(通过指纹岭位)，又有一定的定量作用(通过相关性高)，在一定程度上可较全面地控制药品的质量。再者通过对原药材、有效部位(或中间体)和成品的指纹图谱控制，亦基本可解决批一致性问题。因此，为了提高中成药的质量，实行指纹图谱是必要的.
1．3  对中药注射剂实行指纹图语标准的重要性
    我国现已批推生产的中药注射剂大约有100个左右，生产企业近400家。由于中药注射剂大多是采取水提酵沉等简单工艺提取精制后直接制成注射泼，没有中间产品阶段，而且为了保证澄明度好，精制时造成大量有效成分的损失。再者质量标避要求过低，据有关部门统计，有30％的品种缺乏专属
性鉴别，l帆的品种缺含量测定部分，90％以上品种的检查项目缺项，故不能保证注射剂的质量。不但疗效不稳定，而且注射剂又是直接注入人体，易发生过敏、热原反应等副作用，是中成药中问题最大的一个剂型，的确应该整顿，提高质量。SDA要求已上市的中药注射剂应提高和完善质量标准草案，并制订指纹图谱检测际冶是非常必要的。
1，4  对一般二类药亦有执行指纹图语标准的必要
    鉴于—般中药二类药(除注射剂外)系先提出有效部位(群)再投料制成成品制剂，所以非常适宜制订指纹图谱标准，以提高二类中药的质量，解决批不一致问题。估计在不久的将来，对所有二类中药新药均要实行指纹图谱检测标准，最后—类中药新药亦要实行，应引起广大研制和生产单位的重视。
2  已上市中药注射剂生产单位的因由对策
2．1  生产企业首先应确定自己的中药注射这是否有可能被重新批准和有无必要再生产
    由于已上市品种要求在2004年年底前按<<中药仿制药品实行标准管理规定》提高和完善并起草试行标准，而且要求在此基础上制订药材和制剂的指纹图谱标准，否则将取消批准文号。因此，若具有下列情况之一者，建议放弃该中药注射剂标椎的重新申报，不再生产该品种，①本来已停产或巾
场销售很少者，已无再投入巨资重新研究、申报新标准的必要。②原制备工艺粗糙、质量标准简单，估计经努力仍难达到要求者。有些品种原药材不符合制备注射剂的要求，或工艺不合理，有效成分损失很大，基于当时的情况已获批准，但按现在要求，明显达不到着、应放弃，以免造成不必要的人
力、物力和财力的浪费。②无经济实力负担研究、申报新标准或无法做到固定品种、药用部位、产地、采收期，而生产出合格产品考。因药材生产应达到GAP的标准，制剂生产要求达到GMP标准，加之提高标淮和制订指纹图谱检测标准的研究、申报，费用巨大，另外还需强大的技术支持，若企业自
身无力负担，应放弃。④处方过大的中药注射剂。因每味药材均要制订指纹图谱标准，研究工作量和经费成倍增加，技术难度亦大，故应慎重考虑是否放弃。
2．2  应确定药材的品种和药用部位
    由于以前批淮的注射剂存在药材多种来源或不同药用部位入药的现象，放应重新确定药材为单一植物来源，并明确药用部位，否则无法制订和实施指纹图谱标准。例如人参既有野山参、园参、朝鲜人参、生晒参、红参等品种，入药部位有人参芦头、人参须根和整个人参，各自的指纹图谱均有差
异，故应详细确定来源和药用部位。
2．3  确定产地，建立符合GAP要求的药材生产基地
    产地不同、药材质量差异很大，一般应选择该药材的道地产地，按GAP标淮建立药材种植基地，固定采收季节和加工方法，以保证符合药材指纹图谱的要求：亦可与符合GAP要求助药材种植基地签订供货合同、保证所提供药材符合标准要求。一定要保证药材质量稳定，批间差异应达到最小，才能
符合指纹图谱的要求。
2．4  早找有能力研究、制定标准的合作伙伴
    由于提高标推和制订指纹图谱标淮的技术难度较大，一般企业无力独自承担，所以应考虑和科研院所或大专院校合作，共同研究制订。有多个厂家生产的品种、最好联合多家企业，由国家药典委员会牵头组织，共同完成。
2．5  一定要制订严格的药材生产和成品生产的操作规程(SOP)，以保证产品符合指纹图谱标准
    因提高了的标准和指纹图谱标准要求比较高，只有在保证药材和成品的批—致性的基础上才能合格。因此，不但要建立符合GAP的药材生产基地和符合别P的生产车间，而且应将每一工序具体分解为若干个步骤，制订详细的S0P，并严格执行，才能保证产品的批一致性。
3  新中药注射剂指纹图谱研究、申报的因应对策
    新中药注射剂的研究、申报除应符合上述已上市中药注射剂的要求外，还应注意以下几点关键问题。
3．1  立项一定要慎重，可行性一定要经过充分论证
    因注射剂是直接注入人体的，安全性尤为重要，国家标准越来越严(指纹图谱即是例子)，研究费用巨大，成功与否的风险比一殷中成药大得多，因此选题一定要慎重.首先，应考虑处方的药物是否适合做注射剂，再者，应考虑临床用药的需要和疗效是否确切，第三，企业是否有能力开发成功，有无生产出稳定优质注射剂的经济基础和技术支持。总之，立项要经过充分咨询和论证。
3．2  应以有效部位(或中间体)投料，并制订其指纹图语标准
    老的中药注射剂，大多没有中间产品，现在整顿亦未做硬性要求。而根据中药注射剂研究试行标准和《中国药典》2000年版(一部)的要求，新曲中药注射剂应有有效部位(或中间体)；并且应制订药材、有效部位(中间体)、成品的指纹图谱检测标淮，以免报批时被动。
3．3  落实好合作伙伴，实行强强联合
    一定要落实药材生产基地(企业)、生产厂家和科研单位，实行强强联合，分工合作，才能保证研究、申报和生产的成功.当然，三者应分别具有GAP、CMP和国家药品监督管理的研究单位备案证书，以及强大的经济、技术后盾。
4  关于中药注射剂指纹图谱标准研究中的技术性建议
4．1  药材、存放部位(A中间体)和制剂的指纹图谱的制定,测定方法最好统一起来，采用一套方法
    药材指纹图谱制订时的提取方法最好和注射剂制备工艺一致，测定方法也应和制剂一致，这样才能保证药材的指纹图谱和中间品、注射剂指纹图谱的高度一致，才能起到按制药材、半成品和制剂三者质量的作用。
4．2  参照物〔对照品)的选择
    参照物应选择和药材中的主要有效成分(或指标成分)，而且该药材中的此类有效成分应该是经提取后已进入制剂中，选择其中的一个其峰面积在指纹图谱中所占的比例较大，且较稳定的成分作为参照物。另外、该参照物最好是《中国药典》收载的对照品。例如双黄连注射剂，其黄苹主要含黄酮
类成分，故应选择一个《药典》已收载的黄酮成分作为对照品，如黄苹甙。如果注射剂中没有合适的成分作参照物、那么可选择一个和注射剂中的有效部位属于一类成分、最好是《药典》中收载的对照品作为内标物。因为同类成分吸收波长相似、保留时间相近，可较好地起到参照物的作用。
4．3  测定方法的选择
    美国FDA对植物药的指纹图谱要求是用光谱(如紫外、红外、傅里叶红外)或色谱(例如高效液相、带二极管陈列检测仪高效液相、薄层、薄层扫描、气相层析)测定，其它还包括：液质联用、气质联用、毛细管电泳等方法。但色谱方法是公认的主流方法，应首先选用高效洒相(HPLC，根据选配不同的检测器，可制作大多数药物成分的指纹图谱)或气相色谱(GC，适宜于挥发油类和其他具有挥发性、低熔点成分)，亦可选用薄层扫描(TLc—scanl适宜于不易用液相、气相制作指纹图谱的药物如人参、黄诧等)和其它方法。
4，4  色谱余件的选择
    制作指纹图谱一般采用高效液相法，而色谱条件，尤其是检测波长的选择非常重要。一殷选择药材和制剂中共有的—类主要成分中的一个代表性成分为最佳分离条件，包括分离柱的类型、流动相、检测波长等。一殷在该检测波长下，同一类成分的吸收强度较大，其它成分较弱或没有吸收，这样可
排除许多成分的干扰，制成的指纹图谱较简单，重点突出。尤其是可保证药材、有效部位(或中间体)和制剂的指纹图谱的高度一致，更易说明该制剂制备时是否加入了这种药材，浓度如何。如双黄连注射液，其中的一个指纹图谱可按黄哗昔的最大吸收为检测波长，以黄萃和注射液中黄萃昔均能很好分
离的流动相及桂子为色谱条件，即可得到一个能够证明注射液中有黄苹的简明指纹图谱。
4．5  可根据所合主要药材数朱确定制件注射剂成品的指纹图谱数
    SDA允许—个注射剂制作多个指纹图谱，对注射剂研制和生产单位来说，最简便实用的方法就是一个主要药材就制作一个指纹图谱，这样既可使所制作的指纹图谱简单化，又可定向控制注射剂的质量，使本来复杂的技术问题简单化。例如双黄连注射液，可根据黄萃首在黄茸中、提取物中和注射
液中均分离良好的液相条件分别制作药材、半成品和注射液的一个指纹田谱，根据绿原酸在金银花提取物和注射液中均能良好分离的色谱条件制作另一个指纹图谱，同时亦可根据连翘制作第3个指纹图谱.
4．6  共有指纹峰和非共有指纹峰的标定
    系制作指纹图谱的一个难题，只有按上述方法将指纹图谱简化后，这个工作才变得简单易行。