RNA的吸印转移法（Northern blot）

　　 在RNA凝胶电泳之前，先用乙二醛等变性剂处理RNA，再在适宜条件下电泳使充分变性的RNA直接吸印到硝酸纤维膜上。固定后除去变性剂，然后进行杂交。

　　试剂：

　　乙二醛：4mol/L（约为30%），经过阴阳离子交换树脂纯化，使pH为5.5～6.0

　　磷酸缓冲液：80mmol/L pH6.5～7.0 磷酸缓冲液：10mmol/L pH6.5～7.0

　　Tris-HCl：20mmol/L pH7.8 二甲基亚砜：分析纯 20×SSC：0.3mol/L柠檬酸钠，3mol/L NaCl

　　基本步骤

　　1.RNA变性　　

　　吸取1μl 80mmol/L磷酸缓冲液，1μl RNA样品（最多100μg），2μl，4mol/L 乙二醇，4μl二甲基亚砜。混匀后，50℃水浴1h，然后放入冰中。

　　2．电泳 变性结束后，加入含有50%甘油的10mmol/L磷酸缓冲液2μl和少量溴酚蓝，混匀后点样于1.0%的凝胶上，以4～5V/cm电压电泳。凝胶电泳液为10mmol/L磷酸缓冲液，pH6.5～7.0。

　　3．转移

　　变性处理后的RNA可以转移并结合到硝酸纤维膜上，转移过程和转移变性与DNA相同。

　　4．固定

　　用20×SSC转移RNA。膜夹在两层干净滤纸中晾干，80℃烤膜2h。

　　RNA膜固定后，放入20mmol/L Tris-HCl中，100℃处理5～10min，去除乙二醛，然后进行杂交。