血清Cj抗体、GM 1 抗体和格林-巴利综合征的相关性研究

血清Cj抗体、GM₁抗体和格林-巴利综合征的相关性研究

中国神经免疫学和神经病学杂志 1999年第1期第6卷 论　　著

作者：忻琪珺　程源深

单位：忻琪珺　宁波医疗中心 李惠利医院神经科，宁波 315040；程源深　浙江医科大学附属二院神经内科

　　关键词: 格林-巴利综合征；空肠弯曲菌肠炎；GM₁抗体

　　摘要　目的　格林-巴利综合征(GBS)病因及发病机理探讨。方法　采用ELISA法测定30例格林-巴利综合征(GBS)患者血清抗空肠弯曲菌抗体(Cj-Ab)及GM₁抗体(GM₁-Ab)，并与临床严重程度进行相关分析。结果　GBS组血清Cj-IgG、IgM阳性率分别为60%、30%，较对照组30.8%和7.7%为高，两组差异有显著性，P值均小于0.05。GBS组GM₁-IgG阳性率为38%，而对照组为2.1%，经检验两者差异也有显著性，P值均小于0.05。结论　Cj近期感染与GBS发病相关，而GBS的两种抗体与临床严重程度无明显关系。

　　中图号　R745.4

Study on Antibodies to Cj and GM₁ in Guillain-Barre Syndrome

Xin Qijun　　Cheng Yuansheng

　　(Department of Neurology,Ningbo Medical Centre Li Huili Hospital,Ningbo 315040)

　　Objective　Study on etiology and pathogenesis of Guillain-Barre syndrome.Methods　Anti-gangliosides GM₁ and anti-Cj antibodies in serum were examined in GBS and controls with ELISA assay.Relative analysis was made between those antibodies with clinical severity of GBS.Results　We found anti-Cj IgG,IgM in 18 cases(60%) and 9 cases(30%) of GBS patients,anti-GM₁-IgG in 11 cases(36.7%).There was significant difference for the positive rate between GBS patients and controls group (P＜0.05).Conclusion　Our findings suggested that recent infection of Cj was closely related with the development of GB syndrome.

　　Key words　Guillain-Barre syndrome;campylobacter jejuni enteritis;anti-gangliosides GM₁ antibody

　　格林-巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)是一种周围神经系统急性炎性脱髓鞘疾病，其病因及发病机理尚未定论，多数学者认为它是一种感染后自身免疫或变态反应性疾病，发病与空肠弯曲菌(campylobacter jejuni,Cj)感染有关^［1～4］，并在Cj感染后诱发的GBS患者血清中发现GM₁抗体也增高^［5～7］。推测其发病途径是：(1) Cj与人类GM₁等周围神经成分存在有交叉抗原，感染Cj后产生抗体，通过交叉反应而导致了神经损害^［8］；(2) Cj产生霍乱样肠毒素，与周围神经的神经节苷脂紧密结合，从而产生神经毒性作用，神经膜上GM₁脱落于外围血中诱导产生抗体^［9］。

　　Winer^［10］和Yuki^［11］等认为，Cj感染后诱发的GBS患者临床表现较重，不易缓解，且血清GM₁抗体往往较高，故认为血清Cj抗体、GM₁抗体测定可作为GBS严重程度、预后的指标，而Uwe Enders等则持反对意见^［12］。

　　本研究拟就血清Cj抗体、GM₁抗体阳性与GBS的关系问题进行研究，对GBS病因及发病机理进行讨论。

　　1　材料和方法

　　1.1　材料

　　1.1.1　试剂：空肠弯曲菌菌株(浙江省防疫站)，马抗人IgG、IgM抗体(上海生物制品研究所)，辣根过氧化物酶(Sigma，美国)，GM₁(Sigma，美国)，酶标仪(上海三科仪器厂318-MC)。

　　1.1.2　临床标本：收集浙医二院神经内科1996～1997年住院患者血清1 mL，均新鲜分离，放入-20℃储存备用，共56例。GBS组30例(其中男21例，女9例)，年龄14～68岁，平均年龄(35±17)岁。病前腹泻史或腹痛、呕吐者5例，上感史10例，不明原因发热5例，风疹病史1例，水痘病史1例，急性无黄疸型乙肝1例，病前无诱因者7例。发病后5～60天(d)收取血清，平均病程(18±12) d。Cj抗体对照组26例，性别、年龄均与实验组相匹配。均为病因明确，同期住院患者，包括急性脑血管意外、高血压病、颅内高压症、症状性癫痫、运动神经元病等。以上患者2个月内均无腹泻病史。GM₁抗体对照组为健康献血员，其中GM₁-IgG组94例，GM₁-IgM组76例，其年龄、性别与病例组相匹配。

　　1.2　方法

　　1.2.1　血清Cj-Ig测定：在改良Skirrow培养基上收获Cj菌，离心洗涤3次。用0.01 mol/L、pH4 PBS稀释成10⁷～10⁸ mL超声粉碎(30 s×5，冰水浴)2000 r/min离心弃沉淀，上清液稀释，1∶400包被微孔，4℃过夜，次日取出洗涤3次；加入体积分数为10%小牛血清封闭37 ℃ 30 min，洗涤2次；加入标准品用稀释待检样品37℃ 30 min，洗涤3次；加入酶标抗体(酶标IgG 1∶400，酶标IgM 1∶200)37℃ 30 min，洗涤3次后用OPD显色，2 mol/L硫酸终止反应，用空白孔调零，测定各孔A值，根据标准曲线计算各样值。以上稀释剂为0.01 mol/L pH7.4 PBS，洗涤液为含0.05%(体积分数)的Tween-20。

　　1.2.2　抗GM₁抗体测定：取GM₁用无水乙醇溶解，包被于96孔酶标板，每孔各0.35 μg/0.05 mL，冷风吹干，用质量浓度为20 g/L的BSA-pH7.4 PBS于4℃封闭过夜，洗液洗3次；加入1∶100稀释待检血清每孔0.1 mL,37℃ 60 min，洗涤5次；加入1∶3000稀释的HRP标记兔抗人IgG、IgM抗体(DOKA批号DP214，DP215)，每孔0.1 mL，37℃ 60 min，洗涤5次。另底物OPD每孔0.1 mL显色，避光置20 min，加终止液0.05 mL，选波长492 nm，在酶标仪器测定各孔的吸光度。

　　1.3　结果判断

　　1.3.1　Cj抗体阳性判断：被检血清Cj浓度高于阴性对照2.1倍以上者为阳性。

　　1.3.2　GM₁抗体阳性判断：被检血清A值高于阴性对照2.1倍以上为阳性。

　　1.3.3　GBS临床严重程度判断：(1) 轻型：肌力在Ⅱ度以上，伴或不伴颅神经损害，无呼吸困难。(2) 重型：肌力在0-Ⅰ度伴呼吸困难或严重的呼吸肌麻痹，必须使用辅助呼吸者。

　　1.4　统计学处理　采用两样本阳性率比较的x²检验，两样本均数比较的t检验。

　　2　结果

　　2.1　GBS组与对照组血清Cj抗体阳性率及浓度测定结果　GBS组血清Cj-IgG浓度平均值较对照组高，但在统计学上无明显差异，GBS组Cj-IgG阳性率为60%，和对照组(30.8%)比较，P＜0.05，差异有显著性；GBS组血清Cj-IgM浓度和阳性率与对照组比较皆存在显著差异，P＜0.05。提示Cj感染与GBS发病相关，感染以阳性率表示较合适(表1)。

表1　GBS组与对照组血清Cj抗体浓度及阳性率比较

　　Table 1　Analysis of concentration and positive rate of Cj antibodies of GBS and control group

Group	Number	Cj-Ab
		IgG		IgM
		Concentration 　　(	Positive rate	Concentration 　　(	Positive rate
GBS	30	7.547±7.534	60%(18)*	3.122±1.779*	30%(9)*
Control	26	6.733±9.137	30.8%(8)	1.584±2.192	7.7%(2)

　　*P＜0.05 compared with control group2.2　GBS组与对照组血清GM₁抗体A值及阳性率结果　GBS组与对照组血清中GM₁-IgG A值、阳性率比较皆存在显著差异，而GM₁-IgM A值阳性率在两组中差别不显著，甚至对照组A平均值大于GBS组(表2)。

表2　GBS组与对照组血清GM₁抗体A值及阳性率比较

　　Table 2　Analysis of A value and positive rate of GM₁ antibodies of GBS and control group

Group	Number	GM1-Ab
		IgG▲		IgM▲▲
		A value	Positive rate	A value	Positive rate
GBS	30	0.258±0.100*	36.7%(11)*	0.112±0.143	3.3%(1)
Control	94▲76▲▲	0.130±0.080	2.1%(2)	0.130±0.110	2.6%(2)

　　^▲Patient number of IgG antibodies in control group is 94;^▲▲Patient number of IgM antibodies in control group is 76;

　　*P＜0.05 compared with control group2.3　Cj抗体、GM₁抗体与GBS组临床严重程度关系分析　统计结果提示，GBS组血清Cj-IgG、IgM、GM₁-IgG、IgM与临床轻型、重型不相关联系(P＞0.05)(表3)。

表3　血清Cj抗体，GM₁抗体与GBS组临床严重程度联系

　　Table 3　Clinical severity analysis between Cj-Ab,GM₁-Ab and GBS

Severity type	Number	Cj-Ab					GM1-Ab
		IgG		IgM		A value	Positive rate
		Concentration	Positive rate	Concentration	Positive rate
Light	23	7.907±8.497	52.2%(12)	2.959±1.316	30.4%(7)	0.203±0.077	43.5%(10)
Serious	7	6.363±2.742	71.4%(5)	3.656±2.917	28.6%(2)	0.275±0.102	28.6%(2)

　　3　讨论　　Cj是一种革兰阴性菌，属于螺旋菌群弯曲菌属，是引起人类腹泻的常见致病菌之一，其传染途径多为摄入被Cj污染的水、食物或接触感染Cj的家禽。在我国Cj的主要传染源为鸡、猪。

　　Cj感染后的GBS，通常在腹泻1～3周后发病，此时大便培养阳性率很低，常需血清学变化证实有无Cj感染。国外报道Cj感染率在15%～64%不等^{［1，13，14］}；国内李春岩^［4］等检测血清Cj-IgG抗体明显高于对照组外，其滴度变化还与临床病程相吻合。本实验对30例GBS患者进行了血清Cj-Ab、GM₁-Ab测定。结果发现，Cj-IgG阳性率达60%，IgM阳性率30%，均与对照组的30.8%和7.7%存在显著差别(P＜0.05)。结合临床，大部分患者(73.3%)来自农村，其中63.7%患者有长期鸡、猪接触或病前喝生水等历史，皆提示本实验GBS病例发病与Cj近期感染有关，阳性率与国外Kaldor报道相近。我国北方地区GBS患者Cj近期感染率为64%，明显高于本实验组，可能与抽取血清样本时患者平均病程、实验条件的差异有关。本实验中GBS组Cj-IgG阳性率明显高于对照组，而Cj-IgG浓度与对照组比较无显著差异，分析其原因可能由于机体对Cj感染产生免疫反应的强或弱存在有个体差异性，这与本结论即Cj近期感染与GBS发病有关并不矛盾，同时也提示Cj抗体的阳性率这个检测指标更能反映GBS患者Cj的感染情况，而浓度的比较容易掩盖其相关性。

　　有学者^［5～7］提出，GBS患者血清中GM₁抗体浓度亦提高，与对照组存在显著差异，推测GBS与自身免疫反应有关。GM₁是神经胞膜最丰富的神经节苷脂之一，它具有抗原性，故血清中GM₁抗体检测是观察神经损害，推测其损害机制的一个比较理想的指标。本实验中GBS组GM₁-IgG阳性率、A值均与对照组存在显著差异，提示GM₁-Ab亦与GBS相关。且GBS组Cj-Ab和GM₁-Ab都比对照组有明显升高，提示两者之间存在一定关联，推测Cj感染引起GBS可能通过自身免疫机制发病，导致神经损害，神经组织成分GM₁脱落于周围血中，从而刺激机体产生GM₁-Ab。其具体机制还有待进一步研究。GBS组患者血清GM₁-IgM无论阳性率还是A值与对照组相比都无差别。提示上述Cj感染致GBS这一机制发生在GBS临床症状出现以前或早期，故临床症状明显期往往看不到GM₁-IgM的明显升高。本组中血清GM₁-IgM阳性患者为1例较为严重的GBS，推测自身免疫不断作用导致临床症状不断出现并加重，故该患者血清中可检测到GM₁-IgM。

　　本研究亦对30例GBS患者Cj-Ab、GM₁-Ab与临床严重程度作了相关比较。GBS患者中重型7例，其中Cj-Ab阳性5例，阳性率达71.4%；而轻型23例中Cj-Ab阳性占15例，阳性率为65.2%，统计结果二组无明显差别(P＞0.05)。Cj抗体与GBS临床严重程度无相关性。GM₁-Ab检测，GBS重型7例中GM₁-Ab阳性2例，阳性率28.6%，轻型23例中抗体阳性10例，阳性率43.5%，统计学处理结果二组也无明显差别(P＞0.05)。因此本实验提示，Cj-Ab、GM₁-Ab与临床严重程度无关。

　　本实验研究表明，Cj感染是GBS发病的致病因素之一，它的致病机制可能与神经组织自身免疫有关，因此GBS血清中GM₁-Ab往往有显著升高，但Cj感染及血清GM₁-Ab的出现与临床病情轻重无明显联系，提示可能存在另外的作用机制导致疾病临床表现轻重不等。这有待进一步研究。

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(1998-03-13 收稿)