点击显示 收起
肾综合征出血热患者特异性抗体及免疫复合物测定
中华微生物学和免疫学杂志 1999年第1期第19卷 出血热
作者:张东海
单位:255036 山东省淄博市中心医院内科
为进一步了解HFRS患者发病过程中特异性抗体及其抗原特异性CIC的形成和意义,平行测定了IgA,IgE,IgG,IgM抗体及上述4类抗原在血清中的水平(抗体几何平均滴度, GMT),并从临床分型(病情严重程度)等角度作了对比分析。同时应用抗NP、抗G2蛋白McAb进行了阻断特异性CIC的试验以比较病程早、后期血清间的差异性;还比较了不同病毒血清型〔汉滩(HTHV);汉城(SEOV)〕之间的差异。
材料与方法
1.HFRS病人血清:采集山东省淄博市54例HFRS病人入、出院血清 各一份, 共108份。另测定不同血清型患者血清共54份(均经血凝抑制试验重新确认) ,其中27份HTHV血清采自济宁,另27份选择病日、性别、临床型相同的淄博市SEOV血清做配对比较,年龄相差 <5岁。16对3~8病日采血(早期),11对10~18病日采血(后期)。
2.试剂:①兔抗HFRS血清、鼠脑HFRSV抗原,由中国药品生物制品检定所俞永新教授赠。②鼠抗人IgA, IgG,IgM抗体及HRP-鼠抗人Igs抗体为医科院基础医学研究所产品。③兔抗人IgE抗体购自DaKo公司。④HRP-鼠抗HFRS:鼠腹水系南京军区总医院产品,纯化后标记HRP(RZ=3.0) 。 ⑤ 抗核蛋白(NP)(A25-1)及抗G2蛋白(A19)McAb鼠腹水,中国预防医学科学院陈伯权教授提供。
3.实验方法: ①血清学分型:采用血凝抑制试验,试剂来自浙江省卫生防疫站。②检测特异性HFRS-Igs采用改良抗体捕获ELISA技术〔1〕。③检测IgA, IgG,IgM型CIC:采用双抗体夹心法〔2〕。④检测IgE型CIC:采用捕获法。参见文献 〔3〕 。⑤阻断试验:将 特异性CIC阳性血清与抗NP或抗G2-McAb混合并调整至最终阳性滴度或工 作滴度。混合物37℃孵育30分钟;3000r/min离心30分钟,上清液为待测样品。每个样品测双孔 (测吸光度值,A490nm),同时测未阻断前终滴度阳性血清A值。
阻断试验阳性计算方法:
以阻断比≥50%为阻断阳性。
结果与讨论
1. 不同临床型患者血清4类Igs GMT值:均是病程后期高于早期,但HFRS-IgA抗体GMT值在轻型病例高于中、重型病例,而 HFRS-IgE,IgG抗体GMT值则在重型病例始终高于中、轻型病例,这些差异在病程早期尤为明显(表1)。提示HFRS-IgA抗体可能具有保护性抗体的作用,而HFRS-IgE,IgG抗体在病程早期可能参与病理损伤。
表1 早、后期HFRS病人4种特异性抗体及其特异性CIC的GMT值
型 别 | 早期(1~8病日) | 后期(10~28病日) | ||||||
轻型 | 中型 | 重型 | 平均 | 轻型 | 中型 | 重型 | 平均 | |
IgA Ab
CIC |
126.99
12.23 |
46.99
5.44 |
36.22
14.91 |
66.87
8.49 |
330.74
35.43 |
198.04
19.87 |
389.93
31.78 |
263.94
23.88 |
IgE Ab
CIC |
37.08
13.48 |
75.58
14.45 |
160.00
65.63 |
64.76
17.48 |
190.37
4.95 |
310.86
12.24 |
570.17
8.27 |
282.52
8.35 |
IgG Ab
CIC |
50.82
12.64 |
163.42
13.20 |
400.00
22.87 |
116.53
13.94 |
943.55
71.69 |
1161.94
61.28 |
1766.54
118.88 |
1131.37
70.98 |
IgM Ab
CIC |
4167.05
24.70 |
3286.46
26.84 |
4755.18
53.84 |
3781.12
28.44 |
10852.66
38.75 |
15020.29
27.80 |
15603.38
47.23 |
13302.52
33.88 |
注:1.病程早期HFRS-IgA,IgE,IgG抗体在轻型与中、重型间P<0.05(t检验);中、重型之间无差异。2.早期病例CIC间t检验,轻与中、重型均为P<0.05。2.抗原特异性CIC测定:IgA型特异性CIC的GMT值在病型间无明显 差异。IgE型特异性GMT值则在轻、中型与重型病例间存在明显差异(P<0.05),在病程早期明显高于后期,其差异性在重型病例表现尤为突出(P<0.05),这些进一步提示HFRS-IgE抗体及CIC在病程早期参与 HFRS病理损伤,其水平与病情轻重相关的可能性。IgG型特异性CIC的GMT值仍以重型病例为高, 且在后期血清明显上升,与HFRS-IgG抗体的上升同步。因此,HFRS-IgG抗体及其CIC可能具有两种作用:在HFRS-IgE抗体及其CIC之后引起进一步损伤;同时在病程后期又肩负清除HFRS病毒的作用。
3.不同型病毒间差异分析:4类Igs GMT值均是HTHV高于SEOV,其中前3种抗体在病毒型间差异有统计学意义(P<0.05) 。4型CIC的GMT值在早期血清均以HTHV高于SEOV;在后期血清则是SEOV高于HTHV(表2)。
表2 两种血清型54例HFRS患者特异性抗体及抗原特异性CIC测定
Ig类型 | 病期 | CIC的GMT | 抗体的GMT | ||
HTAV | SEOV | HTAV | SEOV | ||
IgM | 早 | 62.64 | 10.47 | 4149.87 | 3064.33 |
后 | 9.83 | 25.79 | 7731.77 | 6009.16 | |
IgA | 早 | 10.62 | 3.82 | 121.67 | 36.73 |
后 | 21.78 | 28.03 | 205.87 | 102.93 | |
IgG | 早 | 22.18 | 14.18 | 171.31 | 85.65 |
后 | 35.26 | 47.35 | 2058.66 | 360.64 | |
IgE | 早 | 45.18 | 26.61 | 204.62 | 75.55 |
后 | 9.62 | 10.59 | 233.52 | 83.49 |
4.阻断试验的意义: 在病程早期总的阻断成功率高于病程后期;从不同McAb阻断结果可见, 在病程早期抗G2阻断率低于抗NP,而在后期则相反。这间接提示:①在病程早期形成的特异性CIC中,NP抗原成分多于G2抗原成分,病程后期则相反;②在病程早期形成的特异性CIC中所结合的HFRS病毒量(或暴露的抗原位点,或游离的HFRS病毒抗原成分)低于病程后期, 故清除病毒的能力较低; ③在病程早期,NP抗体及其与NP抗原形成 的CIC成分可能多于G2抗原抗 体及其CIC成分,即可能在HFRS病程中导致病理损伤的因素主要与NP抗原 抗体CIC相关(表3)。与既往报道相吻合〔4〕。IgM型CIC阻断率均低于IgA及IgG型, 提示IgM型CIC结合的病毒量或可溶性病毒蛋白量多于后两种。IgG型的阻断成功率居中,IgA型最高。对IgA型CIC的阻断, 在早期中、 重型病人中两种McAb阻断效应相近(P>0.05)。IgA抗体这种保护性作用是否与机体对HFRS病毒不同结构蛋白产生的抗体应答差异相关, 有必要进行探讨。从不同临床型角度分析,随病情严重程度增加而阻断率随之逐渐降低,此差异在病程早期尤为明显。
表3 NP及G2 McAb阻断HFRS病原特异性CIC结果
病型 | 病期 | 阻断抗体 | IgM型CIC | IgA型CIC | IgG型CIC | |||
血清数 | 阻断率(%) | 血清数 | 阻断率(%) | 血清数 | 阻断率(%) | |||
重型 | 早 | 抗G2 | 5 | 1/5 | 3 | 1/3 | 4 | 0/4 |
抗NP | 5 | 1/5 | 3 | 1/3 | 4 | 2/4 | ||
后 | 抗G2 | 4 | 0/4 | 4 | 1/4 | 6 | 3/6 | |
抗NP | 4 | 0/4 | 4 | 1/4 | 6 | 1/6 | ||
中型 | 早 | 抗G2 | 21 | 14.29 | 14 | 42.86 | 17 | 33.29 |
抗NP | 21 | 28.57 | 14 | 50.00 | 17 | 41.18 | ||
后 | 抗G2 | 22 | 4.55 | 18 | 55.56 | 23 | 30.43 | |
抗NP | 22 | 4.55 | 18 | 33.33 | 23 | 13.04 | ||
轻型 | 早 | 抗G2 | 15 | 6.67 | 11 | 54.55 | 12 | 41.67 |
抗NP | 15 | 20.00 | 11 | 72.73 | 12 | 50.00 | ||
后 | 抗G2 | 16 | 6.25 | 13 | 53.85 | 17 | 41.18 | |
抗NP | 16 | 6.25 | 13 | 30.77 | 17 | 35.29 | ||
合并统计 | 早 | 抗G2 | 41 | 12.20 | 28 | 46.43 | 33 | 33.33 |
抗NP | 41 | 24.39 | 28 | 64.29 | 33 | 45.45 | ||
后 | 抗G2 | 42 | 4.76 | 35 | 51.43 | 46 | 36.96 | |
抗NP | 42 | 4.76 | 35 | 31.43 | 46 | 21.74 |
上述结果提示,在HFRS发病机理中体液免疫因素可能发挥一定作用。参考文献
[1]张东海.改良抗体捕获ELISA方法检测流行性出血热特异性IgE, IgA,IgG抗体的初步研究,中国病毒学,1993,8(3)∶207-212.
[2]张东海,孙辉,高峰.检测肾综合症出血热抗原特异性循环免 疫复合物ELISA方法的建立.中国病毒学,1996,11(4)∶369-372.
[3]杨东亮,汪由昆,李琳,等.流行性出血热特异性IgE,IgD型循环免疫复合物检测及其意义.中华微生物学和免疫学杂志,1993,13∶137-140.
[4]白雪帆,杨为松,张文彬,等.流行性出血热患者对EHFV三种结构蛋白的抗体应答.中华传染病杂志,1992,10(4)∶187-190.
(收稿:1998-02-05 修回:1998-07-02)