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BrdU单克隆抗体的制备及鉴定
中华微生物学和免疫学杂志 1999年第3期第19卷 基础免疫学
作者：韩淑红 邓鸿业 徐志伟 邓玉兰 黄大无 丁桂凤
单位：100083 北京医科大学免疫学系
DNA的5-溴，2’-脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记法近年来作为一种新的、简便、敏感特异的检测方法，在肿瘤生物学、遗传学、分子生物学特别是细胞增殖动力学等领域得到广泛应用，在一定程度推动了相关学科的发展。为了满足广泛开展BrdU标记DNA检测对BrdU特异性单抗的需要，我们制备了一株产生BrdU单抗的杂交瘤细胞株。本文对此细胞株制备过程及单抗鉴定情况作了简单叙述。
由于BrdU是半抗原，需制备完全抗原BU-OVA进行免疫，BU-OVA的制备方法是过碘酸钠氧化法。BrdU单抗制备过程的关键是排除与胸腺嘧啶核苷(TdR)发生非特异交叉的抗体产生细胞，所以，还增加两种用于筛选的抗原即BU-BSA和MU-BSA，其制备方法同BU-OVA。
融合用的细胞为BALB/c小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0，BALB/c小鼠供免疫和诱发单抗腹水。按常规方法融合筛选一株与BrdU反应而与TdR无明显交叉反应的杂交瘤细胞株，经克隆化培养后命名为4F4。用这株细胞接种于小鼠腹腔可产生富含抗体的腹水，其抗体类型为IgG类，ELISA法测其效价在1∶5000以上，FACS分析时稀释度为1∶400，BrdU体内和体外法参入，FACS分析结果表明4F4单抗与未参入有BrdU的DNA无明显交叉反应，并能很好反映参入BrdU的DNA含量的动态变化。半抗原竞争抑制实验表明4F4单抗对BrdU的特异性很高，而与TdR无明显结合现象。综合以上鉴定结果，4F4单抗的敏感性和特异性都很高。此外，由于发生BrdU参入的细胞一定要经过细胞固定及DNA变性处理后才能用BrdU单抗作检测，但处理能够引起细胞凝聚及非特异吸附现象。所以，我们在实验中应用BrdU标记技术时注意克服了这些难点，使4F4细胞株产生的BrdU单抗在对BrdU参入细胞的检测中获得了准确而重复性高的结果。
(收稿：1998-10-21 修回：1999-01-24)