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荧光定量聚合酶链反应检测弓形虫DNA及其临床应用
中华微生物学和免疫学杂志 2000年第4期第20卷 检测技术
作者：符生苗 阮和球 陈鑫萍 庞海云 徐文 凌奕 杨力芳
单位：符生苗 阮和球 陈鑫萍 庞海云 凌奕（570311 海口，海南省人民医院医学研究中心）；徐文 杨力芳（中山医科大学达安基因诊断中心）
我们设计合成了弓形虫(TOX)荧光定量PCR(Fluorescence Quantitative PCR, FQ-PCR)诊断试剂盒，以一种完全闭管式的PCR和荧光探针杂交技术相结合所产生的实时检测定量PCR方法，检测了225例产妇的血清标本和179例新生儿脐血标本的TOX-DNA的含量，同时与免疫指标进行比较，探讨其在弓形虫临床诊断中的应用价值。
225例产妇TOX-IgG阳性29例，阳性率为12.89%，IgM阳性33例(14.67%)，FQ-PCR阳性28例(12.44%)，平均拷贝数值(ml-1)为1.68×105，常规PCR(PCR电泳-EB染色)阳性29例(12.89%)。179例 新生儿TOX-IgG阳性11例(6.15%)，IgM阳性3例(1.68%)，FQ-PCR阳性7例(3.91%)，平均拷贝数值(ml-1)为2.29×105，PCR-EB阳性9例(5.03%)。结果显示，在36例TOX-IgG阳性标本中，FQ-PCR中阳性者仅有26例，TOX阴性者的FQ-PCR阳性有10例，说明ELISA法检测抗体并非直接检测病原体(抗原)，而PCR法直接检测病原体本身。FQ-PCR的反应产物，用电泳和紫外线检测，能得到与常规PCR一样的结果，即都可见225bp的特异性扩增条带。
弓形虫感染的诊断目前多采用ELISA检测弓形虫特异性抗体IgM和IgG，ELISA法方法简单快速，有较好的敏感性和特异性。但抗体检测并非直接检测病原体，难以确诊。PCR方法是检测TOX自身，更准确灵敏地反应了TOX的感染和治疗恢复情况。值得提出的是，血清中TOX的数量与TOX的疗效可能有一定相关性，提示临床医生可根据血清中TOX的数量对弓形虫患者进行动态观察。随着分子诊断概念和技术的发展与推广，FQ-PCR在治疗方案选择和疗效观察方面必将有广泛的应用前景。
(收稿日期：2000-02-01)