亚洲戊型肝炎病毒结构蛋白的变异

【摘要】　目的　了解戊型肝炎病毒的变异。方法　用双脱氧法对亚洲主要戊型肝炎流行国家的戊型肝炎病毒结构基因区段进行了分析，并根据cDNA序列确定了其氨基酸的序列。结果　证明亚洲国家包括印度、缅甸、中国、巴基斯坦、吉尔吉斯坦流行的戊型肝炎病毒在基因水平和氨基酸水平上均有变化，核苷酸变化幅度在5%以内。氨基酸在测定的区域内未发现变异，与美洲发现的墨西哥株相比，亚洲株拟来自同一个祖先，基因和氨基酸水平的变化仅属基因漂移的范围。结论　以亚洲戊型肝炎病毒基因为基础的疫苗将有广泛的保护作用。

　　Genome shift of hepatitis E virus in Asia　Bi Shengli,Zhuang Hui, liu Chongbai, et al. Institute of Virology,Chinese Academy of Preventive Medicine,Beijing　100052

　　Abstract　Dideoxy chain termination method was applied to sequence hepatitis E virus structure gene of Asia isolates,cDNA sequence and amino acid residues were determined. The results showed that among Asia countries: Indian, burma, China, Pakistan and Kirghiz Republic,Hepatitis E virus genome shifted within the range of 5% and amino acid residues shifted within 1% compared with Mexico isolate.Asia Hepatitis E virus isolates have limited genome shift,which suggests recombinant Hepatitis E vaccine based on Asia HEV gene might protect all HEV infection in this area.

　　Key words:　Hepatitis E virus　　Genome shift

　　戊型肝炎病毒的大规模感染及爆发流行主要在亚洲、非洲和美洲的不发达国家。亚洲流行国家主要为印度、缅甸、中国、哈萨克斯坦和巴基斯坦，非洲以索马里最为严重，美洲主要以墨西哥为流行区域。从地理流行病学的角度观察，发现戊型肝炎的爆发流行均发生在中亚和西亚地区。地带相对集中在中国新疆及其相邻的巴基斯坦、吉尔吉斯坦及其向南方向的缅甸和印度。地理位置相对集中的特点说明这些地区流行的病毒在遗传学上可能有密切关系。对这些国家的流行株序列分析和氨基酸一级结构的分析，对病毒的变异和亲缘关系的远近的阐明和疫苗研制的战略方针具有重要的意义。

　　1　材料和方法

　　1.1　标本　所使用的标本分别由各国疾病防疫人员采自流行现场，集中储存在美国疾病控制中心肝炎研究室，储存条件为-190℃。

　　1.2　基因片段的制备　基因片段制备采用IgM抗体介导的病毒捕获法获得病毒基因模板，然后以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)制备cDNA片段^［1］。

　　1.3　cDNA序列分析　采用PCR片段纯化后直接反应的方法，详见参考文献［2］。

　　1.4　软件　以DNASIS分析核酸和氨基酸序列^［3］。

　　2　结果

　　2.1　cDNA序列分析　cDNA序列分析结果表明，亚洲流行的戊型肝炎病毒基因在结构区变异有限，各株同源性在95%以上。基因序列各株之间的变异位置见图1。

　　2.2　氨基酸序列的分析结果　见图2。

1	GGTGAGATCG	GCCGTGGGAT	AGCGCTTACC	CTGTTTAACC	TTGCTGACAC	CCTGCTTGGC	GGTCTACCGA	CAGAATTGAT	TTCGTCGGCT	GGTGGCCAGC
2	..........	....C.....	..........	..........	..........	..........	..........	..........	..........	..........
3	..C.......	....C.....	...C......	.....C....	..........	T.........	..C.......	..........	..........	..........
4	..........	....C.....	...C..C...	.....C....	..........	T.........	..C..G....	..........	..........	..........
5	..........	....C.....	...C..C...	.....C....	..........	T.........	..C.......	..........	..........	..........
6	.....AG...	....C.....	...T..A..A	T.AC......	..........	G..C..C...	..G..C....	.......A..	..........	..C..G..A.
1	TGTTCTACTC	TCGTCCCGTC	GTCTCAGCCA	ATGGCGAGCC	GACTGTTAAG	CTTTATACAT	CTGTAGAGAA	TGCTCAGCAG	GATAAGGGTA	TTGCAATCCC
2	..........	...C......	..........	..........	..........	..G.......	....G.....	..........	..........	..........
3	....T.....	...C......	..........	..........	..........	T.G.......	..........	..........	..........	..........
4	..........	C........T	..........	..........	..........	..G.......	..........	..........	..........	..........
5	..........	C........T	..........	..........	..........	..G.......	....G.....	..........	..C.......	..........
6	....T..T..	C..C..G..T	..........	..........	..........	..C.......	.A..G.....	..........	.........G	....T.....
1	GCATGACATC	GACCTCGGGG	AGTCTCGTGT	AGTTATTCAG	GATTATGACA	ACCAACATGA	GCAGGACCGA	CCGACACCTT	CCCCAGCCCC	ATCGCGCCCT
2	..........	..........	.A..C.....	..........	..........	..........	..........	..........	..........	......T...
3	..........	..........	.A........	...C..C...	..........	..........	...A.....G	..T.......	..........	..........
4	.........T	........A.	.A........	G.........	........T.	..........	A..A..T..G	.....G....	.T........	..........
5	......T..T	........A.	.A..C.....	G.........	..........	..........	A..A.....G	.....G....	.T........	..........
6	C..C..T...	..T..T..T.	.T..G.....	G..C......	..........	....G.....	......T..G	..C..C..G.	.G..T..G..	...T..G...
1	TTTTCTGTCC	TCCGAGCTAA	TGATGTGCTT	TGGCTTTCTC	TCACCGCTGC	CGAGTATGAC	CAGTCCACTT	ACGGCTC
2	..........	..........	C.........	..........	..........	..........	..........	.......
3	..C.......	..........	..........	..........	.T........	T.....C...	..........	.......
4	..C.......	.T........	..........	.....C....	..........	..........	..........	.T.....
5	..C.....T.	.T........	..........	..........	..........	..........	........C.	.T.....
6	........T.	.......A..	......A...	.....G..C.	....TT..A.	..........	..........	....G..

　　

图　1　戊型肝炎病毒中国株与国外5个毒株cDNA序列的比较

　　1为中国株，2～6分别为巴基斯坦，吉尔吉斯坦，缅甸，印度，墨西哥株

　　Fig.1　cDNA sequence of HEV isolates from l to 6 are China, Pakistan, Kirghiz Republic,Burma,Indian and Mexico

GEIGRGIALT	LFNLADTLLG	GLPTELISSA	GGQLFYSRPV
..V.......	..........	..........	..........
VSANGEPTVK	LYTSVENAQQ	DKGIAIPHDI	DLGESRVVEQ
..........	..........	....V.....	..........
DYDNQHEQDR	PTPSPAPSRP	FSVLRANDVL	VLSLTAAEYD
..........	..........	..........	..........
QSTYGS
......

　　图　2　戊型肝炎病毒亚洲分离株和美洲墨西哥株结构区的氨基酸序列

　　Fig.2　Amino acid sepuence of structure region of HEV isolated from Asia and Mexico

　　3　讨论

　　我们从亚洲主要戊型肝炎严重流行的国家收集了戊型肝炎病毒的标本，并对不同毒株病毒的结构区基因进行了序列测定，从研究结果来看戊型肝炎病毒在亚洲流行的毒株在遗传学上十分密切，变异程度有限，其氨基酸的变异也不明显。参照墨西哥株的资料可以断定亚洲戊型肝炎病毒有共同的祖先，分子遗传学上的相似表明这些病毒株的生物学、免疫学性质相近。流行病的资料已证明这些病毒为一个血清型。我们的结果与这个结论相符。

　　分子病毒学的手段对揭示病毒的本质有着重要的意义，其研究结果往往可以指导其预防策略。亚洲流行的戊型肝炎病毒株在遗传学上相近的关系，可以为疫苗研究战略的重要参考资料。我们认为使用中国戊型肝炎病毒基因结构发展戊型肝炎疫苗，将对亚洲地区戊型肝炎的流行控制和预防起到较大的作用。

参　考　文　献

　　1　毕胜利，刘崇柏，曹学义，等.我国戊型肝炎病毒基因组cDNA全序列测定及分析.病毒学报，1992，8(3)：271-279.

　　2　Robertson B H,Khanna B K,Nainan O V ,et al.Epidemiologic pattern of wild-type hepatitis A virus by genetic variation.J Infect Dis 1991,163:286-292.

　　3　Bi S L,Purdy M A,McCaustland K A,et al.The sequence of hepatitis E virus isolated directly from a single source during an outbreak in China.Virus Research.1993 28:233-247.

　　本文为国家九五课题