应用逆转录-聚合酶链反应检测乙型肝炎患者血清中的HDVRNA

丁型肝炎病毒(HDV)是一种缺陷病毒，与乙型肝炎病毒(HBV)同时或重叠感染是导致暴发性肝炎、肝炎慢性化。甚至发展为肝硬变的因素之一。我们采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对各型乙型肝炎患者进行了血清HDV RNA的检测。108份血清采自石家庄市第五医院1994年10月～1995年12月住院患者，均有一项以上HBV血清标志物阳性。计急性肝炎25例，慢性肝炎轻度19例，慢性肝炎中度41例和肝炎肝硬变23例。诊断分型标准符合1995年5月北京第五次全国传染病和寄生虫学术会议和定的病毒性肝炎防治方案(试行)。HDV标志物的检测采用ELISA法，试剂由北京医科大学人民医院肝病研究所提供。血清HDV RNA的检测采用RT-PCR，根据Chao等报道的台湾地区的HDV序列，选择HDV基因组中保守区序列设计引物。引物1为5′-TGGGCAACATTCCGAGGGAC-3′，引物2为5′-TTCGGGTCGGCATGGCATCT-3′，由中国科学院北京科海医疗生物工程公司合成，扩增长度为181 bp。结果，108例各型乙型肝炎患者血清HDV标志物检出率为16.7%(18/108)，其中肝炎肝硬变组血清HDV标志物检出率为34.8%(8/23)，明显高于急性肝炎组的8.0%(2/25)和慢性肝炎轻度组(0/19)；慢性肝炎中度组为19.5%(8/41)，明显高于轻度组(P值均小于0.05)。在108例各型乙型肝炎患者中，血清HDV RNA的检出率为13.0%(14/108)，这14例HDV RNA阳性患者血清HDV标志物均为阳性。血清HDV RNA与HDAg和抗-HD IgM检出符合率分别为83.3%(10/12)和100.0%(3/3)。在3例单纯抗-HD阳性患者血清中检出1例HDV RNA阳性。

　　本文结果显示肝炎肝硬变患者的HDV标志物检出率显著高于急性肝炎和慢性肝炎轻度患者，慢性肝炎中度患者显著高于轻度患者，与国内外学者的研究结果相符。本文结果显示HDV感染是导致肝炎慢性化、病情加重和肝硬变发生的原因之一。

　　在108例各型乙肝患者中采用RT-PCR检出14例HDV RNA阳性，而且这14例HDV RNA阳性患者血清HDV标志物均阳性，在血清HDV标志物阴性患者中无1例检出HDV RNA，说明RT-PCR检测血清HDV RNA敏感特异。血清HDV RNA与HDAg和抗-HD IgM检出符合率较高，分别为83.3%(10/12)和100.0%(3/3)。有文献报道HDAg、抗-HD IgM与HDV RNA是病毒复制指标，三者符合率较高，我们的结果与之相符。血清抗-HD是临床上诊断慢性HDV感染的主要指标，但其不能充分反映HDV在体内存在状态。我们在3例单纯抗-HD阳性患者血清中检出1例HDV RNA阳性，表明体内有病毒复制。因此采用RT-PCR检测血清HDV RNA有助于我们对HDV在体内存在状态有更深入了解。