粘附分子CD11a、CD11b、CD62L在恶性淋巴增殖性疾病的表达

粘附分子CD11a、CD11b、CD62L在恶性淋巴增殖性疾病的表达

中国免疫学杂志 2000年第11期第16卷 肿瘤免疫学

作者：童秀珍　罗绍凯　洪文德　彭爱华

单位：中山医科大学附属第一医院血液科，广州510080

　　关键词: 淋巴肉瘤白血病；急性淋巴白血病；多发性骨髓瘤细胞；细胞 粘附分子

　　摘　要　目的：观察恶性淋巴增殖性疾病肿瘤细胞表面β₂整合素(CD 11a、CD11b)及L-选择素(CD62L)的表达变化及其临床意义。方法：用流式细胞仪检测35例初诊或复发急性淋巴白血病(ALL)、4例慢 性淋巴细胞白血病(CLL)、30例多发性骨髓瘤(MM)、14例淋巴肉瘤白血病及25例正常人骨髓单个核细胞粘附分子CD11a、CD11b、CD62L的表达。结果：①与正常造血细胞比较，CD11b、CD11a在ALL、MM、CLL细胞表达 均下降(P＜0.01)，但在淋巴肉瘤白血病细胞表达无明显改变(P＞0.05)，CD62L 在MM、C LL、淋巴肉瘤白血病细胞表达均下降(P＜0.05)，但在ALL中表达增强(P＜0.05) 。②CD11a 在ALL表达明显高于淋巴肉瘤白血病细胞表达(P＜0.01)，CD62L在ALL表达明显低于淋 巴肉 瘤白血病细胞(P＜0.01)。③浸润组CD11a在ALL表达高于非浸润组，(P＜0.05)。 ④ALL完全缓解组CD11a、CD11b的表达可升至正常范围。结论：恶性淋巴增殖性疾病肿瘤细胞表面上存在多个粘附分子的表达异 常，检测粘附分子有助于判断白血病细胞类型及疗效。

　　中国图书分类号　R733

The expression of adhesion molecule CD11a,CD11b,CD62L on malignant lymphoproliferative disorders and its clinical implications

TONG Xiu-Zhen,LUO Shao-Kai,HONG Wen-De et al.

　　(Department o f Hematology,The First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University of Medical Science,Guangzhou 510080)

　　Abstract　Objective:To investigate the expression of adhes ion molecule including CD11a、CD11b、CD62L on malignant lymophoproliferative dis orders and its clinical implications.Methods:Adhesion mole cule CD11a、CD11b、CD62L of 35 Acute Lymophocytic Leukemia(ALL)、30 multiple mye loma(MM)、4 Chronic Lymophocytic Leukemia(CLL)、14 lymphosarocoma cell leukemia patients and 25 health people were measured by flow-cytometric analysis.Results:①CD11a and CD11b expression were lower on ALL、MM 、CLL cells than the normal hematopoietic cells.CD62L expression were lower on C LL 、MM、lymphosarocoma cell leukemic cells than the normal hematopoietic cells.②T he CD11a was lower expressed on ALL than lymphosarocoma cell leukemic cells,CD62 L was higher on ALL than lymphosarocoma cells leukemia .③The expression of CD11a in the ALL invasion group was much higher than that i n the noninvasive group(P＜0.05).(4)The level of CD11a、CD11b were returne d to normal levels at remission.Conclusion:The observations suggest that there are abnorma li ties in the expression of cell adhesion molecules in malignant lymophoproliferat ive disorders that may help to identify subtypes and object there treatment effe c t.

　　Key words　Lymphosarocoma cell leukemia　Acute leukemi a lymophocytic　Multiple myeloma　Cell adhesion molecule

　　整合素(包括β₁、β₂)及选择素粘附分子在调节正常造血前提细胞与骨髓微环境基质细 胞 /细胞外基质粘附层的粘附起重要作用，并影响其增殖、分化。有研究表明，急性髓系白血 病(AML)细胞表面β₁整合素粘附分子表达的异常，与白血病的发生、发展有关^［1］ 。但有关恶性淋巴增殖性疾病肿瘤细胞表面β₂整合素粘附分子CD11a、CD11b及选择素C D62L的改变如何，报道较为少见。我们对35例初诊或复发急性淋巴白血病(ALL)、4例慢性淋巴细胞白血病(CLL)、30例多发性骨髓瘤(MM)、14例淋巴肉瘤白 血病及25例正常人CD11a、CD 11b、CD62L表 达进行检测，分析其表达特征与临床意义的关系，现将结果报道如下。

　　1　材料与方法

　　1.1　研究对象　正常人25例，男14例，女11例，年龄20～40岁。初诊或复 治MM 30例年龄48～69岁，男18例，女12例，均经骨髓形态及X线、免疫球蛋白检查确诊， 根据D urie分期I、II期12例，III期18例。慢性淋巴细胞白血病(CLL)4例，男3例，女1例，中位 年龄55 岁(50～65岁)。淋巴肉瘤白血病14例，男9例，女5例，中位年龄35岁(15～65)岁。初诊或复 治 ALL 35例，年龄18～60岁，男23例，女12例。其中L₁13例，L₂10例，L₃12例，均经FA B形态及组化染色确诊。急淋患者采用VDLP方案，3个疗程后评价疗效。

　　1.2　细胞株　Raji细胞为淋巴瘤白血病细胞株，SP₂₀细胞为鼠骨髓 瘤细胞株，均由我校微生物研究室提供。

　　1.3　主要试剂　CD11b(MAC-1)、CD11a(LFA-1)、CD62L(L-Selection) 购于LGIBCO(美国)，荧光标记的羊抗鼠IgG购于武汉生物技术研究所。

　　1.4　单个核细胞的制备　按本实验室常规，抽取正常和患者的骨髓3 ml， 肝素抗凝，淋巴细胞分离液密度梯度离心20 min，收集单个核细胞层，用PBS洗涤2次。涂片 染色显示患者的单个核细胞中肿瘤细胞占＞95%，调细胞浓度为5×10⁶ ml^-1，用免 疫荧光分析。

　　1.5　免疫反应　方法参照文献［2］，取100 μl细胞悬液及PS分别加入2 支 试管内，各加CD11b-FLTC、CD11a-FLTC及CD62L-FLTC工作液20 μl，另取两支试管作阴 性 对照，每管加100 μl细胞悬液及PS，再加20 μl阴性对样本(羊抗鼠IgG₁-FITC)，避光 反应30 min，上机。

　　1.6　流式细胞仪检测　光源488 nm的氢离子激光，上机前先用标准微球调 整仪器，使变异系数在2%以内，上机后收集10 000个细胞，荧光强度以对数放大，测试后在 Macin-tosh650计算机上，用cell quest plot软件(美国BD公司产)分析。用带有荧光标记 的单个核细胞的阳性细胞(%)［阳性细胞(%)=阳性细胞数/(阳性细胞数+阴性细胞数)×100%- 非特异结合细胞%］，代表粘附分子CD11a、CD11b、CD62L表达水平。

　　1.7　髓外浸润临床指标判断　出现下列体征之一即归为浸润组：①牙龈明 显增生，肿胀。②肝脾淋巴结肿大。③皮肤结节，穿刺可见白血病细胞。④肺浸润：X线肺 野点片状阴影，化疗后减少或消失，痰中可见白血病细胞。

　　1.8　统计方法　χ²检验及t检验，F检验。

　　2　结果

　　2.1　Raji细胞株、SP20细胞株CD11a、CD11b、CD62L表达　与正常细胞相 比，Raji细胞系的CD11a、CD11b表达均小于5%，而CD62L阳性率97%。SP20细胞系CD11a、C D11b、CD62L表达均＜15%。

　　2.2　不同恶性淋巴增殖性疾病粘附分子CD11a、CD11b、CD62L表达　与正 常造血细胞比较，CD11b、CD11a在ALL、MM、CLL细胞表达均下降(P＜0.01)，但在淋 巴 肉瘤白血病细胞表达无明显改(P＞0.05)，CD62L在MM、CLL、淋巴肉瘤白血病细胞表 达均下降(P＜0.05)，但在ALL中表达增强(P＜0.05)，不同恶性淋巴增殖性疾病 比较，CD11a在ALL细胞表达低于淋巴肉瘤白血病细胞(38%±9.8% Vs 80%±13%，P＜0 . 01)，CD62L在ALL细胞表达高于淋巴肉瘤白血病细胞(70%±5.69% Vs 15%，P＜0.01) ，其余无明显差异。

表1　ALL、MM临床特征及其它检验与CD11a、CD11b、CD62L表达

　　Tab.1　The relation between ALL、MM clinical feature and the expression o f CD11a、CD11b、CD62L

Group	n	Positivety Cell(%)
		CD11a	CD11b	CD62L
ALL	35
Invasive group	18	68.1±16.41)	10.8±4.63	80.2±6.42
Non-invasive group	17	29.1±18.2	15.92±6.53	60.3±9.45
WBC≤20×109	19	40.2±9.83	19.5±5.22)	70.5±5.68
≥20×109	16	39.8±8.83	5.1±3.2	68.4±7.8
MM	30
I、II stage	12	28.8±6.5	12.8±5.6	13.4±4.5
III stage	18	30.2±7.8	15.4±6.3	18.7±5.4

　　note:1)Invasive group;compared with non-invasive group P＜0.01；2)WB C≤20×10⁹ compared with ≥20×10⁹ P＜0.052.3　患者临床特征及其它检验指标与粘附分子的关系　见表1。

　　结果显示CD11a在ALL浸润组高于非浸润组(P＜0.05)，CD11b在白细 胞≤2 0×10⁹组低于白细胞≥20×10⁹组，余未发现异常差异。另外比较ALL CD11a表达 下降组(阳性组)与阴性组的性别、年龄、就诊时血红蛋白、血小板水平等因素，结果无显著 性(P＞0.05)。

　　2.4　ALL患者临床疗效与CD11a、CD11b、CD62L异常 表达 的关系　图2显示CD11b荧光阳性率在缓解组明显高于未缓解除组，P＜0.01。CD62L在 缓解组的表 达低于未缓解组及部分缓解组，P＜0.05。而CD11a荧光阳性率在缓解组明显高于未缓 解组，P＜0.01，完全缓解组CD11a、CD11b、CD62L的表达均恢复正常水平。

　　3　讨论

　　粘附分子包括免疫球蛋白超基因家族(LFA-2、 LFA-3、ICAM-1)、整合素β₁(VLA1-6) 及β₂家族(CD11a、CD11b)及选择素家族CD62L^［3］。与造血干 细胞关系最密切的 粘附分子包括CD62L、VLA-4、VLA-1、CD11a、CD11b，早期造血干细胞CD62L表达 较高，而 定向分化的前体细胞如CFU-GM可能以VLA-4和VLA-1表达为主^［4］。近年来一些学 者证实，肿瘤细胞表面粘附分子的异常改变，有的表达下降，有的表达则明显增加，这与恶性血液病的发生、免疫分型、浸润、转移有关。文献报道急性白血病的肿瘤细胞表 面粘附分子有异常改变^［5］，尤其是整合素β₁、β₂改变最为明显，与白血病 的发生有关。慢性淋巴细胞白血病CD49/CD28及β₂整合素表达下降，而淋巴瘤及毛细胞白 血病患者浸润组CD54、CD11A、CD49E/CD29表达增高^［6］。另一资料显示多发性骨髓 瘤细胞表面不表达CD11a、CD11b、CD61、CD62L，但CD11a在浆细胞白血病及临床上有明显侵 润的MM表达则增加^［2］。提示CD11a与临床侵润有关。本资料结果显示：与正常造血 细胞比较，CD11b、CD11a在ALL、MM、CLL细胞表达均下降(P＜0.01)，但在淋巴肉瘤白 血病细胞表达无明显改变(P＞0.05)，CD62L在MM、CLL、淋巴肉瘤白血病细胞表达均下 降(P ＜0.05)，但在ALL中表达增强(P＜0.05)。提示恶性淋巴增殖性疾病肿瘤细胞表面存 在多种粘附分子的异常改变。推测干细胞表面粘附分子异常的表达，不能与骨髓微环境基质 结合，未成熟的造血细胞从末梢释放，失去正常调控，形成恶性细胞克隆。

图1　不同淋巴增殖性疾病粘附分子的表达

　　Fig.1　The expression of adhesion molecule on different malignant lymopho proliferative disorders

图2　ALL患者临床疗效与粘附分子表达关系

　　Fig.2　The relation between the adhesion molecules and treatment effect on ALL

　　不同恶性淋巴增殖性疾病比较，CD11a、在ALL细胞表达低于淋巴肉瘤白血病细胞(38%±9.8%，80%±13%，P＜0.01)，CD62L 是在 ALL细胞表达高于淋巴肉瘤白血病细胞(70%±5.69%，15%，P＜0.01)，其余无显著差 异。ALL与淋巴肉瘤白血病，有时在临床骨髓片上很难鉴别，检测CD11a、CD62L可能有助两者的鉴别。有文献报道粘附分子CD 11b/CD18在M4、M5型表达明显高于其它类型的白血病^［1］，CD54、CD56在M3型白血 病表达高于其它类型的白血病^［5］，也进一步提示粘附分子的异常有助于白血病细 胞分型。

　　最近文献报道干扰素^［7］，及反义寡核苷酸技术抑制bcr/abl融合基因表达能恢复β ₁整合素的功能，从而抑制CML细胞的增殖^［8］。针对细胞粘附分子ICAM-1的单克 隆 抗体，在鼠骨髓瘤模型显示出明显的抗肿瘤作用^［9］，显示通过调节肿瘤细胞的粘 附分子表达或以细胞粘附分子为靶点的导向治疗，将有可能成为肿瘤治疗的一种新途径。本 资料显示化疗后完全缓解组，CD11b、CD11a的表达可升至正常范围，提示有效的化疗药物可 调节白血病细胞粘附分子的正常表达，检测粘附分子CD11b、CD11a的改变可预示化疗疗效。

　　本课题受广东省卫生厅基金A1999146资助

　　作者简介：童秀珍，女，35岁，在职博士生，主要从事血液病免疫改变的研究

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［收稿2000-03-30］