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中药安体维康胶囊(Antivirus compound，ATVC，国家新药注册名称：华蟾益肝胶囊，临床批号2006L01147)是山东临沂肝胆病研究所研制的中药复方制剂，具有清热解毒、疏肝活血、健脾利湿之功效。临床主要用于治疗慢性乙型肝炎轻、中型，湿热瘀阻、肝郁脾虚证。为观察与安体维康胶囊功能主治有关的主要药效学指标和临床疗效。本文进行了 D一半乳糖胺(D-GlaN)所致小鼠急性肝细胞损伤保肝降酶实验和临床研究。1材料与方法1．1材料1．1．1动物实验：①受试药物：剂量设置：人日服量为20 g生药，以60 kg体重计算，按体表面积折算，安体维康剂量设置3个剂量组，分别相当于1／2临床量、临床等效量、2倍临床量。安体维康胶囊含量：7．63 g生药/g粉，批号：021106，由中国中医科学院中药研究所制剂室提供。用时以蒸馏水配制成所需浓度的混悬液。②阳性对照药：联苯双酯滴丸：北京协和药厂(批号02100101)生产；③造模用药：D．半乳糖胺盐酸盐由北京科技协作中心精细化学分部提供；④试验动物：KM小鼠，SPF级，雄性，体重18～22g，购自北京生物制品研究所实验动物中心(合格证号：SCXK 11-00-0010)：⑤试验仪器：索福ST 21台式高速冷冻离心机(美国)：ZS-3型半自动生化分析仪(中国科学院生物制品研究所北京中生生物工程高技术公司)；Sakura自动脱水机(日本)；Leitz切片机(德国)；Sakura RSH-100自动染色机(日本)；Nikon光学显微镄(日本)；OlympusBH-2自动照相生物显微镜(日本)。⑥试剂：门冬氨酸氨基转移酶试剂盒(AST)，批号021118；丙氨酸氢基转移酶试剂盒(ALT)，批号030120，均为北京北化康泰临床试剂有限公司产品。1．1．2临床对照试验：①病例选择：所选病例均为HBsAg、 HBeAg、HBVDNA阳性，ALT、AST、T-BIL均升高，肝脏B超呈损伤声像图，病程超过6个月，年龄18～60岁。孕妇或严重慢性病者不在选入之列。②诊断标准：慢性乙型肝炎的诊断按2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会．病毒性肝炎防治方案中的标准…，选择慢性乙型肝炎治疗组60例、对照组57例。1．2方法1．2．1动物实验方法：①实验组设置：昆明种小鼠，雄性，体重18～22 g。按体重随机分为对照、模型、联苯双酯、安体维康1．6g生药／kg、3．2g生药／kg、6．4g生药／kg6组。②给药途径、容量和时间：各组均灌胃给药，1次，d，连续14 d，0．2 mFlog体重；对照组和模型组灌胃等容量蒸馏水。⑨实验方法：除对照组外，其余各组小鼠取血前48 h腹腔注射D．半乳糖胺800 mg／kg造模，第15天称小鼠禁食后的体重，摘眼球取血，离心，分离血清，比色法测定血清ALT、AST含量；各组小鼠脱颈椎处死，取肝脏称重后，计算肝脏指数，10％甲醛固定，用石蜡包埋、切片。采用HE(Haematoxylin&Eosin染色，用显微镜进行组织形态学观察。④观察指标：测定血清中ALT、AST)含量，计算抑制率(％)=[(模型组均值一用药组均值)，模型组均值×100％]；肝指数=[肝重(g)，体重(g)×100％]，结果见表2。病理处理：取肝组织固定于10％甲醛溶液中，进行病理组织学检查。肝脏取材后流水冲洗，剃度乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋，切片，HE染色，中性捌脂胶封片，光学显微镜观察，记录各鼠肝组织病变情况，以秩和检验统计，结果见表3(附彩色照片)。⑤统计方法：ALT、 AST含量及肝指数均用Mean~sd表示，采用EXCEL统计软件组间t检验进行分析；肝组织病变情况，以秩和检验统计。1．2．2临床试验方法：①研究设计：采用配对分组法，纳入慢性乙型肝炎治疗组60例、对照组57例。②给药方法：泊疗组口服安体维康胶囊4粒(0．3 g，粒，批号：970408，980217)，3次，d，饭后服用：水飞蓟素77 mg，次，3次，d，饭前服用。对照组口服水飞蓟素77 me,／次，3次，d。两组均静滴甘利欣，40 ml／d，1次，d，连续用药3或6个月。③HBeAg、FIBVDNA和肝功能的检测：HBsAg、抗-HEs、l-meAg、抗-HBe、抗-HB~的标志物检测采用酶联免疫吸附试验(ELSA)测定。I-IBVDNA采用PCR仪测定，血清ALT，肝胆B超等项目，于治疗前、治疗1个月、2个月、3个月、6个月后各检测1次。④疗效判断标准：显效：HBsAg、HBeAg、HBVDNA均转阴性，AL'I正常；有效：除HEsAg外，HBeAg、HBVDNA转为阴性， ALT、AST正常；无效：未达到上述标准者。统计HBsAg、 I-IBeAg、HBVDNA各项转阴率。⑤统计分析：计量资料(均数)显著性检验采用U(，l>100时)、z(n=25~100时)和 T(n<25时)检测。计数资料用卡方或U检验。
3．1动物实验结果：①安体维康对D．半乳糖胺急性肝损伤小鼠血清ALT、AST的影响：模型组较对照组小鼠血清ALT、 AST明显升高(P<0．05、P<0．001)，提示造模成功。联苯双脂200 mg瓜g、安体维康6．4 g瓜g组D．半乳糖胺急性肝损伤小鼠血清ALT水平明显降低(P<0．05)；联苯双脂、安体维康1．6、3．2、6．4 g／kg组血清AST水平均明显降低(P均<0．001)，且安体维康3个剂量组显示一定的量效关系。各组的肝脏指数无明显差异，见表l。②病理观察结果：肉眼观察：对照组肝组织颜色正常，切开断面无明显异常；模型组部分肝组织颜色发黄，切面呈颗粒状；给药各组个别肝组织颜色发黄，大部分肝组织较正常。镜下观察：对照组肝细胞未见肿胀及脂肪变性，未见炎症细胞浸润。模型组肝组织汇管区有单核及淋巴细胞为主的炎症细胞浸润，枯否氏细胞增生肥大，小叶中央区为主的单个肝细胞变性、坏死及灶性坏死，变性的肝细胞肿大，可见胞浆疏松化，嗜酸性增强，核浓缩，核溶解等现象；给药各组肝组织病变有不同程度减轻。见表2。肝组织损伤程度判断标准如下：正常肝细胞结构(一)；肝中央静脉周围轻度炎症细胞浸润及个别肝细胞肿胀(+)：肝中央静脉周围炎症细胞浸润，枯否氏细胞增生，灶状坏死较明显(++)；肝中央静脉周围炎症细胞浸润，枯否氏细胞增生及肝细胞肿胀严重(+++)。表2结果表明：联苯双酯及安体维康3个剂量组均能减轻D．半乳糖胺所致小鼠肝组织病变程度(P分别为<0．01、<0．05、<0．01、<0．01)。3．2临床试验结果：①安体维康对慢性乙型肝炎ALT、AST的影响：慢性乙型肝炎患者的ALT在治疗3个月后，治疗组与对照组的复常率分别为96．67％(58／60)、92．98％(53／57)，两组无显著性差异(P>0．02)；AST分别为95％(57160)、78．9％(45／57)，有显著性差异(P<0．01)；血清胆红素两组无差异，见表3。②安体维康的副反应：体外试验显示，细胞的存活率与药物浓度呈负相关，其CD50为2．54 mg／ml。动物急性毒性试验小鼠口服安体维康1日内最大耐受量为528 g生药／kg，按公斤体重计算，此剂量是临床用量的889倍，观察7 d内无任何毒副反应”。观察发现3例患者服药3或5 d后有胃部不适、轻度恶心，减量至3粒后症状减轻。
3讨论
研究表明，华蟾素、葸醌甙、苍术酮均有抗乙肝病毒作用。也有用含有虎杖、丹参、白术、甘草的中药抗乙肝病毒或治疗乙肝获效的报道。这类中草药多有清热利湿、化瘀益气作用。中药安体维康胶囊是复方中药制剂，由蟾皮、虎杖、白术等组成，依据中医药学理论，采用先进工艺研制，主要成分有华蟾素、葸醌甙、苍术酮等。安体维康胶囊的主要药效学试验从体内、外抗乙型肝炎病毒、急性肝损伤、慢性肝损伤及免疫调节功能等方面共8项指标进行了药效学实验研究，同时，进行了急性毒性试验和6个月的大鼠长期毒性试验观察。对猪血清诱导的大鼠慢性免疫性肝纤维化具有明显的预防和治疗作用。
本研究用安体维康进行保肝降酶作用的临床和实验研究，结果①安体维康6．4 g/kg组可明显降低D．半乳糖胺急性肝损伤小鼠血清ALT水平；3个剂量组均能明显降低血清AST水平，表明安体维康对D．半乳糖胺急性肝损伤小鼠具有明显的保肝降酶作用。②病理观察结果，3个剂量组均能明显减轻 D．半乳糖胺所致小鼠肝组织病变程度。③临床研究表明，安体维康治疗慢性乙型肝炎时，治疗组在服药3个月时ALT96．67％恢复正常，对照组为92．28％，两组无明显差异。可能与两组均用了保肝药有关。但对于AST治疗组(95％)高于对照组(78．9％)，有显著性差异。④安体维康服用方便，但个别患者口服后有轻度恶心等胃部不适反应。这与复方中药的提取物对胃肠黏膜的刺激作用有关。减量或饭后即服可减轻不良反应。