脉心康对脂蛋白E基因敲除小鼠
动脉粥样硬化干预作用与机制探讨
郑广娟 张文高 刘龙涛
王显刚 秦芳 张静 赵洪敏
山东中医药大学 济南
概述
临床研究
基础研究
意义、创新点及不足
结语
致谢
研究背景
心脑血管病是目前危害人类健康的主要杀手，而高脂血症、动脉粥样硬化及其所致心脑血管疾病则是人类死亡的首位原因。基因敲除鼠模型的问世给高脂血症、As及心脑血管疾病的研究带来了飞跃。给我们从后天饮食环境等因素与先天遗传因素的双重角度深入研究带来了机遇。
本研究的理论基础及研究方法
本课题将从器官、组织、细胞、亚细胞、分子、（离子、基因及膜电位）等不同水平探讨脉心康调脂、抗As及稳定As斑块的多层次、多靶点作用及机制。
高脂血症、As的中医病机多属“脾肾气虚为本，痰瘀毒三邪内蕴为标 ；因而确立益气、化痰降浊、活血解毒的中医治则。
目 的
本课题旨在通过临床研究，观察脉心康对高脂血症及颈动脉粥样硬化患者血脂和颈动脉粥样斑块的影响及临床疗效；通过基础研究，观察脉心康对食饵性高脂大鼠及载脂蛋白E基因敲除小鼠血脂及动脉粥样硬化的影响并探讨机理。
高脂血症与动脉粥样硬化的
中医治则
补益脾肾以固本
痰之化无不在脾，痰之本无不在肾。肾气亏虚、脾失健运是高脂血症与As的本虚之所在，故治疗中强调补益脾肾以固本。肾气充足，脾气旺盛，则水谷精微运化、输布正常，清者自升，浊者自降，自可去痰浊，化瘀毒，清脂浊。
祛痰、化瘀、解毒以治标
肾气亏虚，脾失健运而致痰浊内生。痰浊内阻，又逐渐形成瘀血，痰浊瘀血互结，日久内生毒邪，痰浊、瘀血、内生毒邪使脉道受损、阻塞，气血不畅而致病。因此，以化痰降浊、活血化瘀的同时，还应注意解毒。一可降浊脂化瘀血，通畅脉道；二可清除内生毒邪，减少脉道损伤。
脉心康的组方用药
人参：补益五脏之气
银杏叶：活血化瘀、化痰降浊
降脂红曲：健脾消食，活血化瘀
绿茶 : 解毒化痰并调和诸药
诸药合用，共奏益气健脾补肾、化痰降浊、活血解毒之功。
技术路线图
实验一 脉心康对ApoE （ -/-）小鼠
血脂影响的研究
体内实验
对TC的影响
对TG的影响
对LDL-C的影响
结果提示：
随着时间的延长，在不给药的情况下，ApoE(-/-)小鼠血脂的各指标会在6周龄的基础上持续上升；而在6周龄时给予脉心康、洛伐他汀、血脂康干预治疗，血脂各指标上升缓慢，甚至低于6周龄的水平。说明脉心康、洛伐他汀、血脂康均能减缓和对抗ApoE(-/-)小鼠血脂的升高，且脉心康与洛伐他汀和血脂康作用相当。
实验二 脉心康抗ApoE（ -/-）小鼠
动脉粥样硬化作用研究
一、脉心康对ApoE（-/-）小鼠动脉粥样 硬化的影响
图2－7 各组动脉
正常组
6周龄小鼠
模型组
洛伐他汀组
血脂康组
脉心康组
6周龄小鼠
模型组
模型组
正常组
洛伐他汀组
血脂康组
脉心康组
正常组
6
周龄小鼠
模型组
模型组
洛伐他汀组
血脂康组
脉心康组
正常组
6
周龄小鼠
模型组
模型组
洛伐他汀组
血脂康组
脉心康组
正常组
正常组
6周龄小鼠
模型组
模型组
模型组
洛伐他汀组
洛伐他汀组
血脂康组
血脂康组
脉心康组
脉心康组
二、脉心康对ApoE（-/-）小鼠主动脉
NF-кB mRNA表达的调控作用
正常组 阴性对照
正常组
模型组
模型组
洛伐他汀组
洛伐他汀组
血脂康组
血脂康组
脉心康组
脉心康组
各给药组与模型组比较，
NF-κBmRNA阳性细胞表达率
均明显降低。
NF-κB mRNA阳性细胞表达率
三、脉心康对ApoE（-/-）小鼠主动脉
MMP-9 mRNA表达的调控作用
正常组 阴性对照
正常组
模型组
模型组
洛伐他汀组
洛伐他汀组
血脂康组
血脂康组
脉心康组
脉心康组
MMP－9 mRNA阳性细胞表达率
各给药组与模型组比较，
MMP-9 mRNA阳性细胞
表达率均明显降低。
实验三 脉心康对ApoE（-/-）小鼠
肝组织的病理形态学影响
正常组
模型组
洛伐他汀组
6周龄小鼠
血脂康组
脉心康
实验四 流式细胞仪检测脉心康对
ApoE（-/-）小鼠肝细胞内钙的影响
阴性对照组
正常组
模型组
洛伐他汀组
血脂康组
脉心康组
结果显示，模型组肝细胞内钙离子浓度明显增加，脉心康组、洛伐他汀组及血脂康组肝细胞内钙离子浓度均呈下降趋势，且脉心康优于洛伐他汀和血脂康。
脉心康对ApoE（-/-）小鼠肝细胞内钙Fluo-3/AM荧光值的影响
体外实验
实验一 脉心康对载脂蛋白E基因敲除
（ApoE-/-）小鼠原代培养的肝细胞
内钙的影响
加药前后肝细胞形态学观察
加药前 10×10
加药前 10×25
生理盐水组 10×10
生理盐水组 10×25
洛伐他汀组 10×10
洛伐他汀组 10×25
血脂康组 10×10
血脂康组 10×25
脉心康大剂量 10×10
脉心康大剂量组 10×25
脉心康小剂量组 10×10
脉心康小剂量组 10×25
肝细胞内钙的Fluo-3/AM荧光染色的
激光共聚焦显微镜观察
生理盐水组
洛伐他汀组
血脂康组
脉心康大剂量组
脉心康小剂量组
加药48小时肝细胞内钙的
Fluo-3/AM荧光值
实验二 脉心康对载脂蛋白E基因敲除
（ApoE-/-）小鼠原代培养肝细胞
线粒体膜电位JC-1的影响
加药48小时肝细胞内线粒体膜电位Jc-1 荧光染色的激光共聚焦显微镜观察
生理盐水组
洛伐他汀组
血脂康组
脉心康大剂量组
脉心康小剂量组
加药48小时肝细胞内线粒体膜电位Jc-1
的红色荧光/绿色荧光比值
讨 论
血脂升高是主要基础
As与斑块稳定性的相关研究
平滑肌细胞增殖与As
As的超微结构变化
核因子κB与As
基质金属蛋白酶与As
肝与脂代谢及As
一、As病因发病机理的有关问题
二、高脂血症与动脉粥样硬化
动物模型评价
建立模型的动物条件
建立模型的方法
动物模型特点
三、脉心康组方的现代药理
研究基础
人参有多种化学成分，其中人参皂甙是最重要的有效成分。人参皂甙能促进脂质代谢，调节血脂，降低血清胆固醇，抗动脉粥样硬化。人参皂甙还有显著的抗脂质过氧化作用，改善心肌组织缺氧时的能量代谢 。人参或人参皂甙有抑制血小板聚集的作用。
银杏叶总黄酮能明显降低ApoB和LDL。银杏叶黄酮甙类能够清除氧自由基，调节超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等抗氧化酶的活性，减轻LDL的氧化和ox-LDL对VEC的损伤 。银杏内酯能够抑制血小板聚集。
红曲中含有莫纳可林系列物质，研究发现其对人体胆固醇合成中的关键酶HMG-CoA（羟戊二酰辅酶A）还原酶产生抑制作用。红曲中还含有黄酮酚等天然的抗氧化剂，具有抑制脂质过氧化、减轻肝脏脂肪变性，降血脂，防治As。
绿茶有较强降脂作用，能抑制血清脂质过氧化物的升高。茶叶提取物茶多酚能够抑制胆管对胆固醇的吸收，抑制脂蛋白合成，加速脂质分解清除，抑制脂质过氧化物。
综上所述，四种药物结合应用能够抑制胆固醇和脂蛋白的合成，加速脂质分解代谢，从而降低血脂，抗氧化，保护血管内皮，抑制血小板聚集，抗As。
四、阳性对照药的选择
洛伐他汀(Lovastatin)是第一个上市应用的他汀类降血脂药物,能选择性抑制体内胆固醇合成限速酶羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶，使TC的合成减少，LDL-C合成减少，对动脉硬化和冠心病确切的预防作用，还能降低血清TG水平，升高HDL-C水平。
血脂康是我国自行研发的，以洛伐他汀含量为质量标准的，目前国内销量最大的降脂中成药制剂，其主要组分为特制降脂红曲，大量的临床和实验研究显示，它能够降低血中TC、TG和LDL水平，具有抗氧化，改善肱动脉内皮依赖性舒张功能，保护老年陈旧性心梗患者血管内皮的作用。
五、脉心康的作用及机理探讨
调脂作用
抗As及稳定斑块作用
调节ApoE(-/-)小鼠主动脉NF-кB的mRNA 表达
调节A