北柴胡对他克林致小鼠急性肝损伤的保护作用

【关键词】  北柴胡 他克林 水飞蓟素 肝损伤

    Protective effects of Bupleurum Chinese Dc on tacrine induced fulminate hepatic failure

    WANG Zhanyi1  NAN Jixing2

    1 Zaozhuang College, Zaozhuang  277160；2 Key Laboratory of Organism  Functional Factors of the

    Changbai Mountain （Yanbian University）,Ministry of Education,YanJi 133002

    【Abstract】  Objective  To observe the protective effects of Bupleurum Chinese Dc on tacrine induced fulminate hepatic failure.Methods  Paracetamol  irritated the stomach of mice to make models with the dose of 30 mg·kg-1.Compared to the index of the content of serum AST,ALT,ALP and TNFαof the evened liver liquid,the protective effect of Bupleurum Chinese Dc  ethanol extraction and Bupleurum Chinese Dc  water extraction was observed .Results  Bupleurum Chinese Dc  ethanol extraction and Bupleurum Chinese Dc  water extraction both can distinctly decrease the content of  serum AST,ALT,ALP and TNFα of the evened liver liquid.The protective effect of liver was identical to that of silymarin. Conclusion   Bupleurum Chinese Dc have a certain  protective effect on liver damage caused by tacrine.

    【Key words】  Bupleurum Chinese Dc,tacrine,silymarin,hepatic failure

    北柴胡作为药物广泛应用已有悠久历史，是一个典型的舒肝解郁药物，近年来，国内外对北柴胡的化学成分，药理作用和临床应用等方面进行了较深入系统的研究［1］。但是，对于他克林肝损伤的作用少见文献报道，我们通过动物实验，观察北柴胡对他克林致小鼠急性肝损伤的保护作用。

    1  材料与方法

    1.1  实验动物  昆明种小鼠由延边大学医学部实验动物科提供，体重20～22 ｇ，均为雄性。于恒温25℃的动物室饲养，饲以标准饲料。

    1.2  药品与试剂  水飞蓟素购自中国生物制品检定所，批号050603。北柴胡购自吉林省延吉新药大药房。北柴胡生药材经95％乙醇提取得北柴胡醇提物，北柴胡生药材经水提取得北柴胡水提物。他克林（tacrine）为Sigma公司产品，天冬氨酸氨基转移酶（AST/GOT）、丙氨酸氨基转移酶（ALT/GPT）、血清碱性磷酸酶（ALP）、肿瘤坏死因子（TNFα）试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

    1.3  仪器  Sp4430型全自动生化分析仪（日本Arkray公司产品），BS224型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司出品），SIGMA95308型全自动离心机（Sigma公司产品）。

    1.4  实验方法

    1.4.1  分组与造模：将90只小鼠按体重随机分为9组，即空白对照组，模型对照组，水飞蓟素对照组，北柴胡醇提物大剂量组，北柴胡醇提物中剂量组，北柴胡醇提物小剂量组，北柴胡水提物大剂量组，北柴胡水提物中剂量组，北柴胡水提物小剂量组，每组10只。自由进食两天后开始实验，实验前禁食16 h。实验处理：对照组及模型组用等体积的生理盐水灌胃，水飞蓟素对照组用水飞蓟素(0.2 g·kg-1)灌胃，实验组用北柴胡醇提物（0.1，0.3，0.5 g·kg-1）和北柴胡水提物（0.1，0.3，0.5 g·kg-1）灌胃，连续给药4 d，每次间隔为24 h，末次给药1 h后，除空白组外，其余各组均灌胃给予30 mg·kg-1 的他克林溶液，24 h后脱颈椎处死小鼠［２］。

    1.4.2  血清的制备：小鼠颈动脉取血，静置，3000转/min离心15 min，分离血清，置冰箱（-20℃）中冷冻保存，备用。

    1.4.3  测定指标与方法：小鼠取血分离的血清，在Sigma95308全自动生化分析仪上测定天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、血清碱性磷酸酶（ALP）、肿瘤坏死因子（TNFα）的活性。

    1.5  统计学处理  实验数据用SPSS8.0统计软件进行方差分析，采用均数±标准差（x±s）表示，组间差异用t检验。

    2  结果

    2.1  北柴胡醇提物对肝损伤的保护作用  北柴胡醇提物对他克林致小鼠血清中ALT、AST、ALP、TNFα含量的影响。结果见表1。 表1  北柴胡醇提物对小鼠血清中ALT、AST、ALP、TNFα含量的影响   以上结果表明，给予他克林后，模型组的AST、ALT、ALP、TNFα含量均明显升高，与对照组相比有显著性差异（P＜0.05，P＜0.01），说明造模成功［3］。各给药组的转氨酶含量均明显下降，AST、ALT含量以北柴胡醇提物大剂量组降低更显著（P＜0.05，P＜0.01）。

    2.2  北柴胡水提物对肝损伤的保护作用  北柴胡水提物对他克林致小鼠血清中ALT、AST、ALP、TNFα含量的影响。结果见表2。表2  北柴胡水提物对小鼠血清中ALT、AST、ALP、TNFα含量的影响 以上结果表明，给予他克林后，模型组的AST、ALT、ALP、TNFα含量均明显升高，与空白组相比有显著性差异（P＜0.05，P＜0.01），说明造模成功。各给药组的转氨酶含量均明显下降，AST、ALT含量以北柴胡水提物中剂量组降低更显著（P＜0.05，P＜0.01）。

    3  讨论

    他克林在肝细胞浆中以非质子（T）和质子化（TH+）形式存在。非质子化的他克林（T）通过线粒体外膜进入线粒体内，由于线粒体内外膜间富含H+，T很容易转化为TH+。TH+在线粒体膜电位的作用下进入线粒体基质内。在基质内，TH+可分离为T和TH+，H+留在线粒体基质内，T可以返回线粒体内外膜间隙，进行下一轮的质子转运。此过程加速了细胞能量的消耗，从而导致了线粒体功能障碍，抑制了肝脏线粒体DNA的合成，核糖体和内质网功能障碍，又导致了肝细胞蛋白质水平降低，进而诱发肝细胞凋亡。本实验经他克林造模后，血清中ALT，AST的活性明显升高，ALP，TNFα活性也有不同程度升高。因此，用他克林造成小鼠肝损伤的动物模型是成功的。

    水飞蓟素可以使小鼠血清中酶指标明显下降，有研究发现，水飞蓟素还可以使小鼠肝重量指数下降，但是，因为其副作用大而难以推广［4］。

    北柴胡具有舒肝解郁之功效，能增强机体对有害刺激的非特异性抵抗力。这种作用是非特异的和广谱的，即对有害刺激有非特异性抵抗力，不论机体存在的变化是亢进还是低下，均可能使其恢复正常，有调节或正常化作用。与模型组比较，北柴胡可使小鼠血清中酶指标明显下降，北柴胡醇提物和北柴胡水提物组肝损伤程度明显比他克林组轻，而与水飞蓟素组无明显差异。提示北柴胡有较好的保肝降酶作用，其作用可能是通过提高机体抵抗力，疏通循环，加强排毒等方面的而实现。

【参考文献】
  ［１］ 刘仁慧,王宪龄,刘方洲,等.柴胡黄芩配伍抗大鼠急性酒精性肝损伤作用的实验研究［J］.时珍国医国药,2006,17（2）：17.

［2］ Presoott LF.Paracetamol，Alcohol and the Liver［J］.Br J Clin,Pharmacol,2000,49(4):29.

［3］ 王占一,戴博,李英哲,等.刺五加对他克林致小鼠急性肝损伤的保护作用［J］.延边大学医学院学报，2007,30（1）：31.

［4］ 戴博,宋妍,王占一,等.高山红景天对对乙酰氨基酚所致小鼠急性肝损伤的保护作用［J］.时珍国医国药,2007,18（6）：1305.

作者单位：枣庄学院生命科学系 枣庄市 277160